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淀粉酶的检测

2009-10-29 16:15 来源:
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  胰淀粉酶由胰腺以活性状态排入消化道,是最重要的水解碳水化合物的酶,和唾液腺分泌的淀粉酶一样都属于α-淀粉酶,作用于α-1,4糖苷键,对分支上的α-1,6糖苷键无作用,故又称淀粉内切酶,其作用的最适pH为6.9,可通过肾小球滤过,是唯一能在正常时于尿中出现的血浆酶。

  人体的其他组织如卵巢、输卵管、肺、睾丸、精液、乳腺等的提取物中都发现有淀粉酶活性;血液、尿液、乳液中也含淀粉酶。血液淀粉酶中主要来自胰腺、唾液腺,尿液中淀粉酶则来自于血液。

  测定血清淀粉酶同工酶时,发现有两个主要的同工酶区带及数个次要区带。两个主要区带中的一个和胰腺的提纯物或分泌物电泳的位置相同,因此命名为P-同工酶;另一个和唾液腺提纯物或唾液电泳在同一位置,因此命名为S-同工酶。测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。

  参考值:限定性底物法:

  血清淀粉酶 220U/L(37℃)

  尿淀粉酶 1200U/L(37℃)

  P同工酶 血清115U/L

  尿800U/L

  新生儿血清淀粉酶约为成年人的18%,主要为S-型,到5岁时达成人水平;在一岁内测不出血清P-型淀粉酶,以后缓慢上升,在10~15岁时达成人水平。

  血清淀粉酶和尿淀粉酶测定是胰腺疾病最常用的实验医|学教育网搜集整理室诊断方法,当罹患胰腺疾病,或有胰腺外分泌功能障碍时都可引起其活性升高或降低,有助于胰腺疾病的诊断。尿淀粉酶水平波动较大,所以用血清淀粉酶检测为好,或两者同时测定。淀粉酶活性变化亦可见于某些非胰腺疾患,因此在必要时测定淀粉酶同工酶具有其鉴别诊断意义。

  1.血清淀粉酶升高:最多见于急性胰腺炎,是急性胰腺炎的重要诊断指标之一,在发病后2~12h活性开始升高,12~72h达峰值,3~4天后恢复正常。淀粉酶活性升高的程度虽然并不一定和胰腺损伤程度相关,但其升高的程度越大,患急性胰腺炎的可能性也越大,因此虽然目前还都用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标,但其特异性和灵敏度都还不够高。当怀疑急性胰腺炎时,应对患者血清和尿淀粉酶活性连续作动态观察,还可结合临床情况及其他试验,如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定共同分析,作出诊断。

  淀粉酶测定对监测急性胰腺炎的并发症如胰腺假性囊肿,胰腺脓肿亦有价值,此种时候血淀粉酶活性多持续升高。重症急性胰腺炎时可以引起胸腔积液或/和腹腔积液,积液中的淀粉酶活性甚至可高于血清淀粉酶活性100倍以上。

  急性胰腺炎的诊断有一定的困难,因为其他急腹症也可以引起淀粉酶活性升高。所以当怀疑急胰腺炎时,除应连续监测淀粉酶外,还应结合临床情况及其他试验,如胰脂肪酶、胰蛋白酶等测定结果共同分析,作出诊断。

  慢性胰腺炎淀粉酶活性可轻度升高或降低,但没有很大的诊断意义。胰腺癌早期淀粉酶活性可见升高。

  淀粉酶活性中度或轻度升高还可见于一些医|学教育网搜集整理非胰腺疾病,如腮腺炎、急性腹部疾病(消化性溃疡穿孔、上腹部手术后、机械性肠梗阻、肠系膜血管病变、胆道梗阻及急性胆囊炎等)、服用镇痛剂、酒精中毒、肾功能不良及巨淀粉酶血症等情况,应加以注意。

  血液中淀粉酶能被肾小球滤过,所以任何原因引起的血清淀粉酶升高时,都会使尿中淀粉酶排出量增加,尤以急性胰腺炎时为多见,急性胰腺炎时肾清除淀粉酶的能力加强,其升高可早于血淀粉酶,而下降晚于血淀粉酶。

  2.淀粉酶同工酶:血清淀粉酶除来源于胰腺外,还来源于唾液腺及许多其他组织,所以在淀粉酶活性升高时,同工酶的测定有助于疾病的鉴别诊断。P-同工酶升高或降低时,说明可能有胰腺疾患;S-同工酶的变化可能是源于唾液腺或其他组织。当血清淀粉酶活性升高而又诊断不清时,应进一步测定同工酶以助鉴别诊断。有许多方法可以测定同工酶,琼酯糖和醋纤膜电泳法都是比较常用的方法。

  淀粉酶的测定结果受方法的影响较大,不同方法参考值亦有所不同,临床所用方法也较多,因此必须了解所用测定方法和其参考值,才能作出正确的诊断。

  作为胰腺疾病尤其是急性胰腺炎诊断的试验,淀粉酶测定应用已久,试验方法曾屡经改进,已经有过200多种方法。其试验基本原理都是把病人的标本(含淀粉酶)和作为底物的多糖一起进行反应后,测定反应后的剩余底物或产物来计算淀粉酶的医|学教育网搜集整理活性。很久以来一直以淀粉为底物,但由于淀粉来源物质不同,其分子结构、分子量变化都很大,因而会影响到淀粉酶的测定。多年的研究结果,认为从天然物质中提取的淀粉分子结构差异很大,不宜用做底物。现在已经改用限定性底物法,即选用结构明确,性质稳定的小分子低聚糖作为底物,能产生稳定的限定性产物,然后测定反应产物(发色团或葡萄糖)量来计算淀粉酶活性。

  用做限定性底物的一般有4~7个葡萄糖(戊糖、庚糖等),并连有发色团如β2-氯-4-硝基酚-G7、ethylidene-G7PNP等。试验中所用的工具酶α-葡糖苷酶来源不同时,其水解淀粉酶作用后产物的程度也不同,也会影响的测定结果。

  很多阴离子有激活淀粉酶的作用,其中以Cl-,Br-为最强。血清甘油三酯浓度高时,可以抑制淀粉酶活性,应将标本加以稀释,以降低其影响。由于Ca2+是淀粉酶分子组成的部分,所以除肝素外,一般抗凝剂如草酸盐,枸橼酸盐等因能与Ca2+结合,抑制淀粉酶活性而不宜应用。

  另外应该注意淀粉酶的测定方法操作要简单,快速,适于急诊应用,因为急性胰腺炎需要尽快诊断和治疗。

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