一、实验目的

1.学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理；

2.掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；

3.学会722型分光光度计的正确使用，了解其工作原理；

4.学会数据处理的基本方法；

5.掌握比色皿的正确使用。

二、实验原理

根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果医\学教育网搜集整理。

用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用的显色剂有邻二氮菲（又称邻菲啰啉）及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。而目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。

在pH=2～9的溶液中，Fe²⁺与邻二氮菲（phen）生成稳定的桔红色配合物Fe（phen）₃²⁺，

此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺（NH2OH·HCl）将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：

三、仪器与试剂

仪器：722型分光光度计、容量瓶（100mL，50mL）、吸量管

试剂：硫酸铁铵NH4Fe（SO4）2·12H2O（s）（A.R.）、硫酸（3mol·L-1）、盐酸羟胺（10%）、NaAc（1mol·L-1）、邻二氮菲（0.15%）。

相关阅读：

铁的比色测定实验步骤>>