红霉素软膏系由红霉素和软膏基质加工制成的外用抗菌素，是目前临床常用于脓疱疮等化脓性皮肤病及小面积烧伤、溃疡面的感染。中国药典2000年版采用抗生素微生物检定法测定其含量，该方法周期长，操作繁琐，影响因素较多。本文介绍的高效液相色谱法，采用优化的色谱条件，使红霉素软膏的含量测定操作简便，专属性高，重现性好，可以替代微生物检定法。

仪器与试药

A gilent LC1100 高效液相色谱仪，A gilent LC1100 自动进器，A gilent LC1100 紫外检测器,，依利特色谱柱（大连依利特科学仪器有限公司， 填料:：sinoch rom ODS2BP 5Lm; 416mm ×250mm ） ，A gilent LC1100 数据处理仪。红霉素对照品由中国药品生物制品检定所（批号: 0307-9713） ；红霉素软膏3 批（批号031005、031216、040513） ，规格乙腈为色谱纯；磷酸二氢铵、三乙胺为分析纯,，水为超纯水。

方法与结果

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：011mol·L - 1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH615） 2乙腈（70:30） ；流速110m l·m in- 1；检测波长210nm；进样量20LL。在上述条件下，测得红霉素对照品溶液色谱图， 红霉素的保留时间约为615m in，与杂质峰的分离度均大于115 。

对照品溶液的制备

精密称取红霉素对照品325mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，配成对照品贮备液,再精密量取2mL置25mL量瓶中，加流动相配制成每1mL含红霉素015mg的对照品溶液。

供试品溶液的制备

精密称取样品5g，置分液漏斗中，加石油醚80mL，缓缓振摇,使其质溶解，用磷酸盐缓冲液（pH615）提取4次，每次约25mL，合并提取液，置100mL量瓶中，用磷酸盐缓冲液（pH615）稀释至刻度,摇匀，配制成每1mL含红霉素015mg的供试品溶液。

线性关系

分别精密量取上述对照品贮备液015、110、210、410、810、1210、1610mL至25mL量瓶中,加流动相至刻度。分别进样20LL ，记录色谱图。以峰面积（Y） 对进样量（X）绘制标准曲线，回归方程为:：Y= 32798+ 95934X, r= 019999。结果表明，红霉素在进样量310～ 80Lg 的范围内，峰面积与进样量之间呈良好的线性关系。

精密度试验

取试验用对照品溶液，重复进样5 次，记录色谱峰面积， RSD 为0155%。溶液稳定性

取试验用供试品溶液在室温放置，分别于0、1、3、5h取20LL 进样，记录色谱峰面积，RSD 为0113%。

结果讨论

检测波长的选择

取红霉素对照品用流动相溶解并制成每1mL中含015mg的溶液，在190nm～300nm的波长范围内扫描,在210nm的波长处有最大吸收，因此选择210nm为检测波长。流动相的选择

在实验过程中，选择不同盐浓度和不同pH值的流动相进行比较，发现盐浓度的增加可改善红霉素与有关物质的分离度，流动相pH值的提高也可改善红霉素与有关物质的分离度，考虑到对色谱柱的损耗。故选用用011mol·L-1磷酸二氢馆溶液（三乙胺调节pH615）2乙腈（70∶30）作为流动相。

用HPLC法测定红霉素的含量,准确性及重现性均较好，且操作简便，HPLC法与微生物检定法进行比较，测定结果基本一致，因此可以用HPLC法替代微生物检定法测定红霉素含量。