双向琼脂扩散试验方法：

原理常用于定性检测，也可用于半定量检测。将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶板上相邻近的小孔内，让它们相互向对方扩散。当两者在最适当比例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。根据有否出现沉淀线，可用已知的抗体鉴定未知的抗原，或用已知的抗原鉴定未知的抗体。临床常用本方法检查原发性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作为原发性肝癌的早期辅助诊断。

甲种胎儿蛋白（α-Fetal protein， AFP），是胎儿组织及体液中的正常组织成份。胎儿在第9周才出现此种蛋白，13～19周达高峰，到21周后逐渐下降，胎儿出生后该蛋白即行消失或含量甚微，普通试验方法检查不出，而肝癌病人及个别卵巢癌或睾丸癌病人的血清检出有此种蛋白。

材料

1.抗AFP血清、已知肝癌病人AFP阳性血清、待检病人血清。

2.1.2%琼脂（用生理盐水配成）。

3.载玻片、毛细吸管、湿盒。

方法

1.制备琼脂玻片 将已知加热溶化的1.2%琼脂3.5ml，迅速倾入载玻片上。

2.打孔 待凝固后用打孔器按下图样打孔。（孔径3mm，孔距4mm）

3.加样 以上方孔为第1孔医|学教育网搜集整理，按顺时针方向分别称为2、3、4、5和6孔，中央孔为7孔。7孔加入抗AFP血清，1、4孔加入已知AFP阳性血清（或AFP），作为阳性对照孔；6孔加入已知AFP阴性血清，作为阴性对照孔，其余2、3、5孔为试验孔，加入待检血清。

4.温育 置湿盒室温或37℃温育12-24 h.

结果观察

1、4孔与7孔间应出现白色沉淀线，6与7孔间应不出现白色沉淀线。若2、3、5孔与7孔间出现白色沉淀线而且与阳性对照沉淀线吻合者，即为实验阳性，表明待检血清中含有AFP（即AFP阳性）。如出现与阳性对照相连接，且呈枪刺状如上右图中4与5孔间，说明二者间有共同抗原成分；如出现成交叉的沉淀线，则是非特异性沉淀反应，为假阳性反应，乃判为实验阴性，表明待检血清为AFP阴性。