只要坚持、努力,胜利就会属于你!“抗核抗体”是检验职称考试需要掌握的知识,那“抗核抗体的检测方法”有哪些呢?以下是医学教育网小编为大家整理的相关知识,希望有助于大家备考!祝大家考试顺利,取得好成绩!
由于抗核抗体(ANA)的复杂性及多样性,故测定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫荧光法、放射免疫法、ELISA、免疫双扩散、对流免疫电泳及免疫印迹技术等。
常用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)作为总的ANA筛选试验。鼠肝常用于检测抗核抗体,但近十年来多被HEp-2细胞所代替,这是因为HEp-2细胞具有以下特点:
人源性;
细胞核大;
分裂期细胞多;
可大批量培养。
当然,单个细胞不可能替代组织切片,所以鼠组织切片仍继续用于自身抗体的检测。
ELISA法:
临床上主要是应用间接ELISA检测抗dsDNA抗体,其重复性及敏感性均较对流免疫电泳及双扩散为高。目前已有试剂盒供应。
放射免疫法:
常用于检测抗DNA抗体,有Farr法及过滤法。
(1)Farr法的原理为用同位素标记DNA,被标记的DNA和被检血清的抗DNA抗体结合,经50%硫酸铵饱和液沉淀,然后比较沉淀物和上清液中的放射活性,从而得出DNA结合活性,一般结合率大于20%为阳性。
(2)过滤法是在分离结合物时用纤维素酯薄膜滤器(孔径为0.45μm)进行过滤,游离的DNA被滤去而与抗体结合的复合物被阻留在滤膜上。
免疫印迹(immunoblotting)法:
先将混合抗原作凝胶电泳,分离开不同的区带,然后将这些带转印到硝酸纤维素膜上,最后用酶标抗体或放射性同位素标记抗体进行检测和分析。
由于该试验不需纯化的单个抗原,可在同一固相上作多项分析检测,灵敏度高,特异性强。故目前已广泛用于自身免疫病患者血清中多种自身抗体的检测,如检测抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SS-A抗体及SS-B抗体等。
另外,还可用传统的琼脂双向扩散法、医学|教育网搜集整理对流免疫电泳法、间接血凝法和补体结合试验等。这些试验要求的实验条件比较低,但敏感性也比较低。
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