吞噬细胞功能检测技术

吞噬细胞功能检测技术

体内具有吞噬功能的细胞群称为吞噬细胞，按其形态的大小分两类：一类为大吞噬细胞即单核一吞噬细胞系统（MPS），包括血液中的大单核细胞及其进入各种组织后发育而成的巨噬细胞及树突状细胞等；另一类为小吞噬细胞，亦即中性粒细胞。

大吞噬细胞除能非特异性地吞噬杀灭病原体、衰老病残和突变的细胞外，还在特异性免疫形成过程中，参与抗原识别和递呈，生成多种细胞因子，参与迟发型**反应和多种自身免疫性疾病的病理损伤。小吞噬细胞以吞噬功能为主，发挥非特异性免疫防疫作用并参与机体的免疫应答炎症损伤等。吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。

一、中性粒细胞功能检测

（一）趋化功能检测

1.原理　中性粒细胞在趋化因子如微生物的细胞成分及其代谢产物、补体活性片段（C5a、C3a）、某些细胞因子等作用下产生趋化运动，其趋化运动强度可反映中性粒细胞的趋化功能。

2.方法学

（1）滤膜渗透法（Boyden小室法）

（2）琼脂糖平板法

（二）吞噬和杀菌功能测定

1.显微镜检查法　将白细胞与葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合温育，涂片，固定，碱性亚甲蓝液染色。在油镜下观察靶细胞对细菌的吞噬情况，计数吞噬细菌和未吞噬细菌的白细胞数。对有吞噬作用的白细胞，应同时记录所吞噬的细菌数。

2.溶菌法　将白细胞悬液与经新鲜人血清调理过的细菌（大肠杆菌或金黄色葡萄球菌）按一定比例混合，温育。每隔一定时间取定量培养物，稀释后接种固体平板培养基。37℃培养18小时后，计数生长菌落数，以了解中性粒细胞的杀菌能力。

3.NBT还原试验

二、巨噬细胞功能检测

人噬细胞一般从外周血或经斑蝥敷贴形成的皮泡液中获取，也可从肺泡灌洗液或患者腹膜透析液中分离。实验室用于基础研究，探讨巨噬细胞与疾病的关系和筛检免疫增强药物等情况下常用小鼠腹腔巨噬细胞。巨噬细胞功能的检测方法如下：

（一）炭粒廓清试验

（二）吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞（CRBC）、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蝥敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。将巨噬细胞与鸡红细胞悬液在体外混合，温育，涂片，染色，油镜下观察、计数，通过计算吞噬率和吞噬指数来反映巨噬细胞的吞噬功能，并通过观察鸡红细胞的消化程度，判断巨噬细胞消化功能。

（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定

巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶和溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的指标之一。

1.酸性磷酸酶的测定

2.非特异性酯酶的测定

（四）细胞毒作用测定

（五）巨噬细胞促凝血活性测定