HLA分型

HLA分型

HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。

一、血清学分型法

血清学分型法，是应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。因分型血清和淋巴细胞用量少，称为补体依赖的微量细胞毒（CDC）试验。能够应用该法检测的抗原称为SD抗原，包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DR、HLA-DQ。

二、细胞学分型法

细胞分型法，是以混合淋巴细胞培养（**C）或称混合淋巴细胞反应（**R）为基本技术的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原，包括HLA-D、HLA-DP。**C又有单向和双向之分。

（一）单向**C

根据选用的刺激细胞类型，可将单向**C分为阳性和阴性分型法。

1.阴性分型法

又称纯合子细胞分型法。

2.阳性分型法

阳性分型法又称预致敏淋巴细胞分型法（PLT）。

HLA-D抗原可用阴性和阳性分型法检测，HLA-DP抗原只用阳性分型法检测。

（二）双向**C

遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向**C。

本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度，双向**C强度与两个体间HLA抗原差异成正比，器官或细胞移植时，应选择**C最弱者为供体。

三、分子生物学分型法

（一）RFLP与PCR-RFLP分型法

限制性片段长度多态性（RFLP）分析，是最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术。这种HLA分型法称为DNA-RFLP。若对DN**段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加，此类引入DNA体外扩增技术的限制性片段长度多态性分析则称为PCR-RFLP分型法。

PCR-RFLP分型法所应用的PCR引物为HLA组特异性的，此法特别适应于小量标本的研究和异基因骨髓移植供者的选择。

（二）PCR-SSO分型法

序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-SSO）是PCR与杂交相结合的技术，从而对扩增产物作出HLA型别判断。

PCR-SSO是Ⅱ类HLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP等位基因。

基因芯片是近年发展起来的一项新技术，将其与PCR-SSO结合应用于HLA分型，可使分型趋于规模化和自动化，尤其在HLA多态性和疾病遗传背景分析等方面更具优势。

（三）PCR／SSP分型法

该方法应用设计的一套HLA等位基因的序列特异性引物（SSP），对待测DNA进行PCR扩增，从而获得HLA型别特异性的扩增产物。

（四）PCR-SSCP分型法

单链构象特异性-聚合酶链反应（PCR-SSCP），是以待测基因PCR扩增为基础，对扩增的DNA单链（ssDNA）的HLA分型方法。

（五）SBT分型法

基于序列的HLA分型法（SBT），可通过对扩增后的HLA基因片段进行的核酸序列测定判断HLA型别。

除上述方法外，业已建立的HLA基因分型技术还有PCR异源二聚体电泳多态即PCR指纹图分析、虚拟DNA分析、嵌合体测定、差异显示PCR、扩增非变异突变系统或扩增阻滞突变系统（ARMS）等。