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免疫球蛋白的分离提纯

免疫球蛋白的分离提纯:

Δ 目的

有利标记;减少非特异反应;有利Ig定量

Δ 分离提纯方法(原理):一般选用2~3种,或同一方法反复进行2~3次

盐析法:在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水,降低带电电势,亲水性变为疏水性,分子间相互凝聚而沉淀(盐析作用)。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同,故可分离不同蛋白质。常用中性盐:硫酸铵分析纯试剂

离子交换层析法:利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同,与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附,然后进行解脱,达到纯化蛋白质目的。常用载体:纤维素DEAE,带正电,吸附带负电的Alb、α、β球蛋白

凝胶过滤法:凝胶颗粒是网状结构,当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时,分子大的先下来,分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来,从而将分子大小不同的物质分离开来,即为分子筛的作用。常用凝胶:葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶,分离Ig多用G150

亲和层析法:利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性,将纯化抗原先交联到载体(琼脂糖珠)上,制成亲和层析柱,当Ab(Ig)通过时,与抗原特异性结合在柱上,Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度,使Ab解脱下来。

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