免疫球蛋白的分离提纯

Δ 目的

有利标记；减少非特异反应；有利Ig定量

Δ 分离提纯方法（原理）：一般选用2~3种，或同一方法反复进行2~3次

盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。常用中性盐：硫酸铵分析纯试剂

离子交换层析法：利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。常用载体：纤维素DEAE，带正电，吸附带负电的Alb、α、β球蛋白

凝胶过滤法：凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。常用凝胶：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，分离Ig多用G150

亲和层析法：利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合在柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。