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酶免疫技术是利用酶催化底物反应的生物放大作用，提高特异性抗原-抗体免疫学反应检测敏感性的一种标记免疫技术。

（1）酶和酶作用的底物：

①辣根过氧化酶（HRP）：是一种糖蛋白，含糖量约18%；分子量为44kD；是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰；辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H₂O₂是受氢体底物，DH₂无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。

②碱性磷酸酶（AP）：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0；用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。

③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。

（2）酶标记的抗体或抗原：

称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法（包括有一步法和二步法）和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。

（3）固相载体：

主要试剂：固相的抗原或抗体、医学`教育网搜集整理酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。

（4）免疫吸附剂：

固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被。如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。