参考方法：

　　采用即将替代GB/T5413.10-1997的新国标（还没有医`学教育网搜集整理正式公布）。

　　方法步骤：

　　1、试剂和耗材：HPLC 级正己烷（CAEQ-4-011518-2500）；无水硫酸钠（CBEQ-4-103502-1000）；HPLC 级甲醇（CAEQ-4-003302-4000）；HPLC 级冰醋酸（乙酸，CAEQ-4-011245－0500）；HPLC 级二氯 甲烷（CAEQ-4-012001-4000）；维生素K1 标准品（CDCT-C17924400）

　　2、提取：称取约2.5g（精确到0.1mg）混合均匀的试样于三角瓶中（含淀粉的试样加入0.5g淀粉酶），用 30ml温水溶解，加入1g酯酶，于37℃恒温空气震荡器中震荡过夜，使其充分酶解。然后加入2ml 10mol/L 氢氧化钠溶液，转移至500ml 的分液漏斗中，加入50ml 乙醇，充分混匀。再加入50ml正己烷，加塞振摇2min，静置分层。放出下层于另一个500ml分液漏斗中再次加入50ml正己烷萃取，静置分层，弃去水相，合并正己烷。加入适量蒸馏水洗有机相两次，医`学教育网搜集整理弃取水相，将正己烷通过无水硫酸钠过滤到500ml的平底烧瓶中，在旋转蒸发器上40℃下蒸发至近干，用正己烷转移残留物到10ml指形瓶中，用氮气吹干，准确加入1ml 正己烷，充分振荡溶解残留物，得到待测液，在冰箱中冷冻一小时后备用。

　　3、HPLC 测定方法：

　　4.1 色谱柱：Cnwsil C₁₈，150×4.6mm, 5μm

　　4.2 衍生柱：锌粉还原柱，35×4.6mm（LAAA-0001）

　　4.3 流动相：甲醇900ml，二氯甲烷100ml，冰醋酸0.3ml，氯化锌1.5g，无水乙酸钠0.5g，溶解过0.45滤膜。

　　4.4 进样量：10μL

　　4.5 流 速：1.0mL/min

　　4.6 检测波长：荧光检测器：波长EX=243nm EM=430nm

　　Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co., Ltd. 医`学教育网搜集整理

　　4、结果分析：

　　4.1、分析图谱

　　VK₁标准溶液色谱图（荧光检测器）0.4ug/ml VK₁标准溶液色谱图（荧光检测器）0.04ug/ml

　　婴幼儿配方色谱图（荧光检测器）

　　5.2、结果分析

　　用Cnwsil C₁₈（150×4.6mm, 5μm）色谱柱和锌粉还原柱（35×4.6mm）串联柱后衍生法分析婴幼儿配方食品中的维生素K₁，分离效果良好，峰形对称，重复性好。