病理性抗凝物检测主要包括狼疮抗凝物质(LAC)测定和凝血因子Ⅷ抑制物检测。
1.狼疮抗凝物质(LAC)测定
(1)筛检试验
1)原理:在脑磷脂和激活剂存在的条件下,检测血浆凝固时间(即APTT)。若被检血浆中有狼疮抗凝物质存在,则血浆凝固时间(APTT)延长。
2)参考值:37.5±4.5s
3)临床意义:筛检试验的血浆凝固时间延长(筛检试验阳性)见于:有狼疮抗凝物质存在的患者、先天性凝血因子缺乏、口服抗凝剂、肝素治疗以及DIC等。
(2)确诊试验
1)原理:筛检是阳性的血浆,若属于有狼疮抗凝物质存在者,则在加入血小板溶解物后,延长的APTT被纠正。
2)结果判断:筛选试验测定值/确诊试验测定值=0.8~1.2。若筛查试验和确诊试验的凝固时间都延长,且比值在正常范围内,提示被检血浆中无狼疮抗凝物存在,可能有其他异常抗凝物存在;若筛查试验的凝固时间延长,而确诊试验的凝固时间缩短(被纠正),提示有狼疮抗凝物存在。
3)临床意义:狼疮抗凝物存在,见于系统性红斑狼疮(SLE)、自发性流产、多发性血栓形成和血小板减少症等。
4)临床评价:LAC的检测也可利用改良的Russell蛇毒稀释试验进行检测,该试验不受FⅫ及FⅦ异常的影响,受检血浆中肝素含量<1.0U/mL对结果也无影响。
2.凝血因子Ⅷ抑制物检测
(1)原理:将受检血浆与正常人新鲜血浆等量混合,在37℃中放置一定时间,按一期法测定混合血浆中的FⅧ活性,同时与正常血浆中的FⅧ活性比较。若受检血浆中存在因子Ⅷ抗体,则正常人血浆的FⅧ活性被抑制或被中和。以Bethesda单位来计算抑制物的含量,能抑制正常人FⅧ活性50%的因子抗体定为l个Bethesda单位。抑制正常人血浆FⅧ活性50%的受检血浆最高稀释倍数为FⅧ抗体的单位数。
(2)参考范围:正常人无FⅧ抑制物。
(3)临床意义:阳性见于反复输血、接受抗血友病球蛋白治疗的血友病A患者、SLE、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、妊娠、恶性肿瘤、DM、结节病等。
(4)临床评价:Bethesda法还可用于其他因子如FⅨ、FⅩ、FⅪ等抑制物的评价。本法对同种免疫引起的因子抑制物测定较为敏感,对自身免疫、药物免疫、肿瘤免疫和自发性凝血因子抑制物则不敏感。FⅧ抑制物的确定,最终还需进行LAC检测以进行排除。