方法名称： 双黄连颗粒-黄芩苷测定-连翘苷的测定-高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中黄芩苷和连翘苷的含量。

本方法适用于中成药双黄连颗粒。

方法原理： 本方法采用高效液相色谱法测定双黄连颗粒中黄芩苷和连翘苷的含量。

本方法适用于中成药双黄连颗粒。

试剂： 1. 甲醇（色谱纯）

2. 乙腈（色谱纯）

3. 磷酸

4. 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）

5. 连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所）

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Create C18柱（4.6mm×250mm，5μm）

1.3二极管阵列检测器

1.4 全自动进样器

1.5 色谱工作站

1.6超声发生器

2 色谱条件

2.1流动相：乙腈+水+磷酸=100+300+1

2.2流速：1.0ml/min

2.3检测波长：230nm

2.4柱温：28℃

试样制备： 1. 标准曲线的制备

精密称取黄芩苷、连翘苷对照品置于同一量瓶中，用甲醇配成0.01088mg/mL（黄芩苷）和0.0352mg/mL（连翘苷）的混合对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取双黄连颗粒约1g研细，取0.1g精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，超声20min，放冷，定容，摇匀，用一次性针头过滤器过滤，即得供试品溶液。

操作步骤： 1. 标准曲线的制备

取混合对照品溶液，进样1、3、5、7、9、11mL，以进样量（mg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：黄芩苷Y=1511046X-81061，r=0.99995，线性范围（0.1088-1.1968） mg。连翘苷Y=519354X-11525，r=0.99991，线性范围（0.0352-0.3872） mg。

2. 供试品的测定

精密吸取供试品溶液5μL注入高效液相色谱仪测定峰面积，外标法计算黄芩苷和连翘苷的含量。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

参考文献： 白奎福，王英，赵丹江，HPLC法共同测定双黄连颗粒中黄芩苷和连翘苷含量，中医药学报，2004，32（2）：13～14