【鉴别】(1) 取该品,置显微镜下观察:不规则分枝状团块无色,遇水合氯醛液溶化;菌丝无色或淡棕色,直径4~6μm 。油管含黄色或棕黄色分泌物,草酸钙簇晶直径18~32μm,存在于薄壁细胞中,常排列成行,或一个细胞中含有数个簇晶。草酸钙针晶细小,长10~32μm,不规则地充塞于薄壁细胞中。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维。种皮石细胞黄色或淡棕色,多破碎,完整者长多角形、长方形或形状不规则,壁厚。
(2) 取该品6g,研细,加乙醚10ml,密塞,超声处理15分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙酮1ml 使溶解,作为供试品溶液。另取当归对照药材0.2g,同法制成对照药材溶液。再取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ml 含1mg 的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环已烷-醋酸乙酯(10:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;喷以5% 三氯化铁乙醇溶液,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
【检查】 应符合丸剂项下有关的各项规定(附录Ⅰ A)。
加味逍遥丸(大蜜丸) 口服:每次1丸,每日2次。 加味逍遥胶囊 每粒0.3克。口服:每次3粒,每日2次。 加味逍遥颗粒(冲剂) 口服:每次2克,每日2次。 加味逍遥片 每片0.3克。口服:每次3片,每日2次。 加味逍遥口服液 每支10毫升。口服:每次10毫升,每日2次。
1.探讨美替拉酮阻断下丘脑一垂体一肾上腺皮质轴(hypothalamic-pituitary-adrenal cortex axis,HPAA)对慢性心理应激小鼠免疫器官和细胞免疫功能有无保护作用,以及加味逍遥丸调节慢性心理应激损伤的作用是否与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴相关。 方法:将小鼠随机分为生理盐水对照组、加味逍遥丸对照组、美替拉酮对照组、美替拉酮合用加味逍遥丸对照组、生理盐水应激组、加味逍遥丸应激组、美替拉酮应激组、美替拉酮合用加味逍遥丸应激组。其中对照组小鼠不予以应激刺激,应激组小鼠采用电刺激条件反射箱诱导建立慢性心理应激模型。检测各组小鼠体质量、血清糖皮质激素水平、胸腺指数、胸腺细胞凋亡率、脾脏自然杀伤细胞活性及淋巴细胞转化率,并观察小鼠胸腺组织病理学改变。结果:各应激组与其相对应的非应激对照组比较,其胸腺指数明显下降,自然杀伤细胞活性及淋巴细胞转化率均明显下降;同时,胸腺细胞凋亡率升高,胸腺组织病理损伤加重。美替拉酮及加味逍遥丸应激组与生理盐水应激组比较,其血清糖皮质激素含量明显下降,自然杀伤细胞活性及脂多糖刺激的淋巴细胞转化率明显升高,胸腺组织病理损伤减轻。美替拉酮合用加味逍遥丸应激组与单纯的美替拉酮或加味逍遥丸应激组各项指标比较,均无明显差异。结论:阻断HPAA对慢性心理应激小鼠的免疫系统有明显的保护作用。加味逍遥丸对慢性心理应激小鼠的保护作用与美替拉酮阻断HPAA的效应基本一致,两者无叠加、协同效应。推测HPAA是加味逍遥丸抗应激损伤的作用靶点之一。
2.探讨交感-肾上腺髓质轴阻断对心理应激小鼠免疫器官结构和细胞免疫功能的影响及加味逍遥丸调节心理应激损伤的作用机理。 方法:利用电刺激心理应激箱诱发心理应激模型、六羟多巴胺阻断外周交感神经、加昧逍遥丸为平行对照研究中药;枪测脏器指数、胸腺细胞凋亡率、NK细胞活性、淋巴细胞转化率、胸腺病理等免疫学指标。结果单纯应激组较单纯对照组小鼠胸腺指数下降、脾指数下降[(0.41±0.13)vs(0.53±0.15);P〈0.05]、胸腺细胞凋亡率升高[(33.21±5.54)%vs(17.79±5.18)%;P〈0.01]、NK细胞活性下降[(22.1±14.1)%vs(35.5±10.3)%;P〈0.01]、淋巴细胞转化率下降(P〈0.01);六羟多巴胺阻断后应激组较单纯应激组NK细胞活性增大[(31.9±14.7)vs(22.1±14.1);P〈0.05]、淋巴细胞转化率升高[(6985±580)cpm vs(4810±598)cpm,ConA(0.5ug/ml);P〈0.01];灌胃加味逍遥丸后应激组较单纯应激组脏器指数升高、胸腺细胞凋亡率下降[(20.37±4.56)%vs(33.21±5.54)%;P〈0.01];二者均能显著降低血糖皮质激素水平(P〈0.05)。结论阻断外周交感神经明显保护心理应激小鼠的细胞免疫功能;加味逍遥丸通过减少胸腺细胞凋亡、防止胸腺和脾脏萎缩、降低血糖皮质激素等方面发挥抗应激损伤作用,其发挥作用的途径可能不是通过阻断外周交感神经实现的。
3.探讨心理应激后小鼠脑区原癌基因(c—Fos、c—Jun)蛋白表达的规律及加味逍遥丸对该蛋白表达的调节作用。 方法 利用电刺激心理应激箱诱发小鼠心理应激动物模型,加味逍遥丸(2mg/g体重)灌胃给药,免疫组化法检测c-Fos、c-Jun蛋白,观察不同脑区核团:海马1—4区(hippocampusCA1—4)、杏仁中央核(central amygdaloid nucleus,CAN)、下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)、下丘脑视上核(supraoptic nucleus,SON)的表达变化。结果 与正常组比较,应激1次后3h组、应激3次后3h组、应激5次后3h组各脑区c-Fos、c—Jun蛋白表达均增强(P〈0.01);与应激1次后3h组比较,应激1次后1h组和应激1次后6h组表达减弱(P〈0.05或P〈0.01);与不服药组比较,服药组应激3次后3h组和应激5次后3h组c—Fos、c—Jun蛋白表达均减弱(P〈0.05或P〈0.01)。结论 心理应激后1h c—Fos、c-Jun蛋白开始升高,3h达高峰,c—Fos蛋白6h已回落近正常水平,c—Jun蛋白6h仍维持在较高水平,多次应激后在同一高峰点未见表达减弱现象;加味逍遥丸对应激后c—Fos、c—Jun蛋白的高表达有明显下调作用。
4.加味逍遥丸对小鼠应激状态调节作用. 方法:本实验采用自制小站台水环境应激小白鼠,应激后灌胃加味逍遥丸,取不同应激时间应激组和给药组小鼠,分别测定小鼠胸腺、脾的重量和指数、5-HT及血清糖皮质激素.结果:随应激时间的加长,小鼠胸腺的5-羟色胺、糖皮质激素的含量逐渐升高,胸腺、脾指数逐渐下降.结论:加味逍遥丸可以有效地改善小鼠的心理应激变化。