方法名称：三黄片—盐酸小檗碱的测定—高效液相色谱法

应用范围：该方法采用高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量。

该方法适用于由大黄、盐酸小檗碱和黄芩浸膏等组成的片剂。

方法原理：三黄片由大黄、黄芩浸膏和盐酸小檗碱组成，是一种具有清热泻火、消炎利便功效的常用中成药。收载于《中国药典》2000年版一部。其中盐酸小檗碱的含量测定标准未作规定。目前文献报道的测定方法有薄层扫描法、脉冲极谱法、分光光度法、示波极谱法和离子选择电极法等。

该方法为高效液相色谱法，紫外吸收检测器于波长347nm处检测盐酸小檗碱的吸收值，外标法计算含量。本法操作简便、精密度高、分离效果良好。

试剂：盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，713 9204）；乙腈为色谱纯，水为高纯水，甲醇、三乙胺、磷酸为分析纯；三黄片为市售品。

仪器设备：1 仪器

1.1仪高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱工作站

1.2 色谱柱

色谱柱：KF C18（250mm×4.6mm,10μm,中国科学院大连化学物理研究所），柱温：室温

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：乙腈 0.05mol·L-1三乙胺溶液（用磷酸调节pH至3.0)=35 65；流速：1.0mL·min-1

2.2 检测波长：347nm，进样量：20μL。

试样制备：1. 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制成36μg·ml-1的对照品溶液。

2.供试品溶液的制备

取该品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱1.8mg），置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理5min，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，再经0.45μm的微孔滤膜滤过后，即得。取大黄粉、黄芩浸膏和其它辅料，按处方比例同法制得三黄片阴性空白溶液。

操作步骤：1. 标准曲线的绘制

分别吸取上述对照品溶液1，2，3，4，5，6ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样10μl测定，以盐酸小檗碱的进样量（μg) 为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程

2. 供试品的测定

精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长347nm处测定吸收值，计算出其含量。

参考文献：周文枭，曾立威，刘伟林. HPLC 测定三黄片中盐酸小檗碱的含量.华西药学杂志，2004，19（3）：220-221

李小燕.HPLC法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量. 中成药，2002， 24（9）：679-680