碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高,应加以鉴别。
碱性磷酸酶也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。与辣根过氧化物酶(HRP)相比,ALP用作标记酶的优点是,稳定性高、灵敏度高,缺点是成本高,标记困难。
在研究中最常用的ALP如下:
◇细菌碱性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase (BAP), 来源:Escherichia coliC4 ;
◇ Shrimp alkaline phosphatase (SAP), 来源:一种北极虾 (Pandalus borealis) ;
◇ 小牛肠碱性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase (CIP);
◇ 胎盘碱性磷酸酶Placentalalkaline phosphatase (PALP)和分泌性碱性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase (SEAP),后者是前者的C末端短缺版——与PALP相比,SEAP没有PALP的C末端最后24个氨基酸(这24个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域)
ALP主要应用于分子生物学和酶免分析中:
★分子生物学中主要用作核酸的去磷酸化。因为DNA通常会在5'端结合磷酸基团,用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端与3'端连接,从而在后续步骤准备好之前让DNA分子抑制处于线性化状态;同样,通过去磷酸化可用作放射标记示踪。通常用作这些目的用的最多的是Shrimp alkaline phosphatase (SAP),因为在反应完成之后它是最容易灭活的。
★酶免分析中应用最多的是ELISA,以竞争法测小分子抗原为例,抗体先与固相载体结合,然后让待测样品与事先经ALP标记过的该抗原竞争地与抗体结合,洗去未反应的过量ALP-抗原,加入显色底物。则可以通过与按梯度浓度变化的标准品绘出的标准曲线对比从而知道待测样品中抗原的浓度。ELISA中用的比较多的是 辣根过氧化物酶(HRP),底物为OPD, 深桔黄色 ,检测波长492nm;TMB, 蓝绿色,检测波长450nm 碱性磷酸酶,底物为PNPP(对-消基苯磷酸酯), 黄色 ,检测波长405nm
★目前工业上一个普遍的应用是作为检验牛奶的巴斯的灭菌的标志:被巴斯德过高温灭菌的分子会被灭活,向其中和未巴斯灭菌的牛奶中加入ALP的底物,2分钟后未灭菌的样品应该显黄色,如果待测样品(指被巴斯灭菌过的牛奶)也能呈现相同颜色,则说明巴斯灭菌温度未过度。当然总有例外,因为有少数细菌会产生耐热的ALP。