利福定在胃肠道中吸收良好。吸收后可弥散至全身大部分组织和体液中，包括脑脊液，当脑膜有炎症时脑脊液内药浓度增加；在唾液中亦可达有效治疗浓度；该品可穿过胎盘。利福定为脂溶性，故易于进入细胞内杀灭其中的敏感细菌和分枝杆菌。分布容积为1.6L/kg。蛋白结合率为80~91%。口服后1.5~4小时血药浓度可达高峰，进食后服药可使达峰时间延迟和峰浓度减低，T1/2为1.5~5小时，多次给药有所缩短。该品在肝脏中为自身诱导微粒体氧化酶的作用而迅速去乙酰化，成为具有抗菌活性的代谢物25-O-去乙酰利福霉素.水解后形成无活性的3-酰利福霉素由尿排出。该品主要经胆道和肠道排泄，可进入肠肝循环，但其去乙酰活性代谢物则无肠肝循环。60~65%的给药量经粪便排出，6~15%的药物以原形、15%为活性代谢物经尿排出；7%则以无活性的3-甲酰衍生物排出。该品亦可经乳汁排出。肾功能减退的患者中该品无积聚；由于自身诱导肝微粒体氧化酶的作用，在服用利福定的6~10天后其排泄率增加；用高剂量后由于胆道排泄机理达到饱和，该品的排泄可能延缓。利福定不能经血液透析或腹膜透析清除。