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蛋白质组及分析技术-临床检验考试

2012-09-29 09:57 来源:
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为了方便广大考生更好的复习临床检验考试,医学教育网搜集整理了临床检验关于蛋白质组及分析技术的相关内容,以供各位考生学习参考,希望对考生掌握基础知识有所帮助。

随着大量生物体全基因组序列的获得,特别是人类基因组序列草图的完成,基因组学研究重点不可避免地从结构基因组学转向功能基因组学,而蛋白质组学(proteom)正是作为功能基因组研究的重要支柱在上世纪90年代中期应运而生。蛋白质组是指一个基因,一个细胞或组织所表达的全部蛋白质成分。蛋白质组学研究的是在不同时间和空间发挥功能的特定蛋白质群体,从而揭示和说明生命活动的基本规律。蛋白质组学可以分为三个领域:①蛋白质的大规模的分离与鉴定,以及它们的表达后修饰;②蛋白水平的差异显示在疾病中的运用;③运用当前的一切手段研究蛋白质与蛋白质之间的相互关系。与基因组相比蛋白质组具有多样性和可变性。对一个机体而言,基因的数目是恒定的,而蛋白质的种类和数目在同一个机体的不同细胞中各不相同,即使同一细胞在不同的时期,不同条件下,其蛋白质表达也不同。虽然可以通过cDNA芯片等方法显示生物体的基因启动状况,但mRNA水平(包括mRNA的种类和含量)并不能完全反映出蛋白质的表达。另外从研究手段方面来说,蛋白质研究技术比基因技术相对要复杂和困难,不仅氨基酸残基数量多于核甘酸残基,而且在蛋白质组研究中没有一种方法象PCR那样能迅速扩增目的片段,这样对于丰度低但功能重要的蛋白质很难进行大规模的研究。

目前,蛋白质组学研究的主要技术包括:双向(二维)聚丙烯酰胺凝胶电泳医学`教育网搜集整理(结合等电聚焦和IEJK)分离蛋白质,在固相载体上形成蛋白质-多肽图谱,用敏感的方法染色(如银染)并用图像分析电子计算机进行鉴定;将蛋白质点切下,用酶消化,进一步用氨基酸分析、质谱分析等进行鉴定;或结合蛋白质的毛细管电泳,高效液相色谱技术(HPLC)以至蛋白质芯片进行鉴定。

蛋白质芯片是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新的方法,它类似于基因芯片,是将蛋白质点到固相物质上,然后与要检测的组织或细胞等进行“杂交”,再通过自动化仪器分析得出结果。这里所指的“杂交”是指蛋白与蛋白之间如(抗体与抗原)在空间构象上能特异性的相互识别。此方法与传统的研究方法相比具有如下优点:①蛋白质芯片是一种高通量的研究方法,能在一次实验中提供相当大的信息量,使我们能够全面、准确的研究蛋白表达谱,这是传统的蛋白研究方法无法做到的。②蛋白质组芯片的灵敏度高,它可以检测出蛋白样品中微量蛋白的存在,检测水平已达ng级。美国科学家Haab等运用绿色荧光标记抗体微阵列,用红色荧光标记蛋白混和物,并运用计算机识别(R/G)的信号强弱,来进行检测,检测水平可达到1ng/ml.③蛋白质芯片具有高度的准确性。

蛋白质组芯片可用于蛋白质组学研究中的各个领域,具体来说大致可分为三个方面:研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用,筛选新的蛋白质;蛋白质芯片能够用于现在其它方法不能检测到的,如蛋白质-药物、蛋白质-脂质之间的相互作用;蛋白质组芯片还可用于检测蛋白与小分子物质的作用。例如蛋白质与DNA,RNA分子等。蛋白质芯片的制作是决定其运用的关键因素之一,蛋白质组芯片的制作比当前流行DNA芯片制作要复杂,特别是涉及大量不同种类的蛋白的高效表达与纯化。因此,蛋白质芯片制作存在费时、费力且成本较高等不足,限制了其在临床的应用。

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