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主讲:网校老师 6月11日19:00-21:30
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主讲:网校老师 6月12日19:00-21:00
详情果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低,无论所用的仪器如何先进,也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活,因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性,最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点:
1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸盐抑制LDH,肝素对CK及某些其他酶有轻微的抑制作用,故一般样品以血清为佳医|学教育网搜集整理。
2.多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。
3.光照对CK活性有抑制作用。因此,主张CK测定的血清应贮存于4℃的暗处,测定时应该注意避光。
4.由于血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用。在它的存在下,某些酶在室温下可保存1~2天而无明显失活。
5.有些酶由于自身的特性。在贮存时需特别加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不稳定,在室温反而稳定时间较长,所以测定LDH活力的血清样品,应置于室温下,2~3天内可保持稳定,不能存放冰箱过夜。
6.由于酶很容易发生表面变性。因此在操作时应避免形成泡沫。
7.巯基对于大多数酶来说是十分重要的,可能起如下几方面的作用:
①参与催化;
②和底物结合;
③组成变构部位;
④维持酶的三级或四级结构。
因此,使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的最重要的条件之一,基于这个理由,在酶的活性测定、抽提、制备以及保存过程中,常可添加-SH保护剂,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇等。
主讲:网校老师 6月11日19:00-21:30
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