方法名称： 环孢素原料药－环孢素－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定环孢素原料药中环孢素的含量。

本方法适用于环孢素原料药。

方法原理： 供试品经乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长210nm处检测环孢素的峰面积，计算出其含量。

试剂： 1. 乙腈

2. 叔丁基甲醚

3. 磷酸

仪器设备： 1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱前连接¢0.25mm×1000mm的不锈钢管），理论塔板数按环孢素峰计算应不低于1500。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：乙腈 水 叔丁基甲醚 磷酸=430 520 50 1

2.2 检测波长：210nm

2.3 柱温：70℃

试样制备： 1. 对照品溶液的制备

精密称取环孢素对照品适量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀释成每1mL中约含环孢素1.25mg的溶液，即为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

精密称取供试品适量，用乙腈-水（1：1）混合溶液溶解并定量稀释成每1mL中约含环孢素1.25mg的溶液，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长210nm处测定环孢素（C62H111N11O12）的峰面积，计算出其含量。