家畜血吸虫病查治技术规范

1 病原学诊断（粪便毛蚴孵化法）

1.1 材料准备

1.1.1 水：pH值6.8～7.2，无水虫和化学物质污染（包括氯气）的澄清水，否则需作如下处理：有氯气的自来水应在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水虫的水加温至60℃，冷却后再用。或在5万ml水中加含30%有效氯的漂白粉0.35g，搅匀，放置20h，待氯气逸尽；也可在放漂白粉后加入硫代硫酸钠0.2～0.4g脱氯，0.5h后再用。对混浊的水，于每5万ml水中加明矾3～5g，充分搅拌，待水澄清后用。

1.1.2 器材、试剂：竹筷、40～80目的铜筛滤杯、260目的尼龙筛兜、500ml量杯、粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻片、盖玻片、取暖炉、水温计、盆、水缸、水桶、剪刀、闹钟、天平、300～500ml长颈平底烧瓶或200～250ml三角烧瓶、脱脂棉。

1.1.3 送粪卡：包括村名、组名、饲养员或畜主姓名、畜别、畜名或畜号、性别、年龄、有无孕、采粪日期。

1.1.4 孵育室（箱）。室温低于20℃时需有保持20～25℃的环境条件，如有温箱或有取暖设备的房间。

1.2 操作方法

1.2.1 采粪和送检：采粪季节宜于春秋两季，其次是夏季，不宜于冬季。采粪的时间最好于清晨从家畜直肠中采取，或新排出的粪便。采粪量：牛、马属200g，猪100g，羊和犬粪（农家）40g，每份粪样需附上填好的送粪卡，于采粪当天送到检验室。

1.2.2 洗粪和孵化：将每头家畜的粪便分三份，每份粪量牛、马50g，猪20g，羊、犬10g.然后根据实际情况选用下列一种方法进一步操作。

1.2.2.1 尼龙兜淘洗孵化法：粪便在40目铜筛和量杯中用清水淘洗，细粪渣存于500ml量杯中，待沉淀后去上清液，沉渣倒入尼龙兜用水冲淘洗，把尼龙兜中的粪渣装入三角烧瓶或长颈平底烧瓶中加25℃左右清水，为便于观察毛蚴，在瓶颈下二分之一处加一块2～3cm厚的脱脂棉，再加清水至瓶口。

1.2.2.2 塑料杯顶管法：置粪于铜筛量杯中加水充分淘洗，弃去粪筛量杯中的上层水，倒去三分之二，加25℃清水，盖上中间有孔的塑料盖再加满25℃清水，再将盛满水的试管口塞一块2～3cm厚的脱脂棉，倒插入塑料盖孔中。

1.2.3 孵育：上述两种方法装好的三角烧瓶、长颈烧瓶或塑料杯放于20～25℃的箱（室）中，在一定的光照（日光或灯光）条件下进行孵育。从孵育开始到1、3、5h后各观察一次，尾蚴多数在水面下2mm范围内呈直线运动。发现血吸虫毛蚴即判定为阳性。血吸虫毛蚴肉眼观察为针尖大小、灰白色、梭形、折光强和水中其他小虫不同之处是在近水面作水平或斜向直线运动，当用肉眼观察难与水中的其他小虫相区别时，可用滴管将毛蚴吸出，置显微镜下可见毛蚴前部宽，前段中间有个顶突，两侧对称，后渐窄，周身有纤毛则可判为血吸虫毛蚴。在一个样品中有1～5个毛蚴为＋，6～10个毛蚴为＋＋，11～20个毛蚴为＋＋＋，21个毛蚴以上为＋＋＋＋。以判断、统计血吸虫病感染的强度。

2 家畜血吸虫病血清学诊断（间接血凝试验）

2.1 材料准备

2.1.1 器材：V型微孔有机玻璃血凝板（孔底角90°），25μl定量移液器，滴管，可插针头的滴管或1～2ml注射器，12号针头。

2.1.2 生理盐水、蒸馏水。

2.1.3 诊断液和阴、阳性血清：按说明书处理和保藏。

2.2 操作方法

2.2.1 用滴管滴4滴生理盐水于血凝板左边第1孔内，用同一滴管加入被检血清1滴，使血清成5倍稀释。

2.2.2 用带12号针头滴管或移液管在左边第2、3孔中各加生理盐水1滴（25μl）。

2.2.3 用移液器将第1孔血清混匀，混匀方法是反复吸吹三次，然后吸25μl已混匀液加入右边邻孔中，此孔血清成1：10稀释。

2.2.4 用移液器和7.2.2.3一样混匀第2孔血清，吸取25μl加入第3孔中，此时该孔血清成1：20稀释。

2.2.5 用移液器和7.2.2.4一样混匀第3孔血清，吸取25μl丢弃。

2.2.6 每份被检血清和阳、阴性血清按同样方法用3个孔，也可不用阴性血清而设生理盐水对照孔，此时另取2个孔各加25μl生理盐水作空白对照。

2.2.7 用带12号针头的滴管或移液管加入1：10、1：20血清稀释孔及空白对照孔各1滴诊断液，使诊断液和血清混匀，置20℃～37℃条件下1～2h，等空白或阴性血清对照孔中血球全部沉于孔底中央，呈一圆形红点，且阳性血清两孔中血球没有全部沉入孔底中央即无圆形红点或仅有很小的圆形红点即可判定结果。

2.3 判定

2.3.1 判定标准

2.3.1.1 红血球全部下沉到孔底中央，形成紧密红色圆点，周缘整齐为阴性（-）。

2.3.1.2 红血球少量沉于孔底中央，形成一较阴性小的红色圆点，周围有少量凝集红血球为弱阳性（＋）。

2.3.1.3 红血球约半数沉于孔底中央，形成一更小红色圆点，周围有一层淡红色凝集红血球为阳性（＋＋）。

2.3.1.4 红血球均匀地分散于孔底，形成一淡红色薄层为强阳性（＋＋＋）。

2.3.2 结果判定：以血清10倍和20倍稀释孔出现2.3.1.2、3、4的凝集现象时，被检血清判为阳性。

2.3.3 如阴性或生理盐水对照孔2h后红细胞沉淀图像不标准，说明生理盐水质量不合标准或血凝板孔未洗净，需检查原因，重新操作。

3 家畜血吸虫病的治疗

3.1 治疗对象的确定

凡用血清学或病原学方法查出的阳性畜，经健康检查除列为缓治或不治的病畜外，均应进行治疗。

3.2 缓治或不治对象

3.2.1 怀孕6个月以上和哺乳期母牛以及3月龄以内的犊牛可缓治。

3.2.2 有急性传染病、心血管疾病或其他严重疾病的牛缓治或不治或建议淘汰。

3.2.3 年老体弱丧失劳力或生产能力的病牛建议淘汰。

3.3 称重或估重

在有条件的情况下，尽可能称重，以便准确计算用药量，无称重条件时则可采用测量估重。

3.4 病畜治疗记录

最好以县（市）为单位统一印制病畜治疗记录表。对已确定的治疗对象，要认真填写治疗登记表。在治疗过程中要认真作好记录，治疗结束后，要整理成册，归档备查。

3.5 治疗的药物和方法

3.5.1 药物：当前用于治疗血吸虫病病畜的首选药物是吡喹酮，其粉剂、片剂或其他剂型一次口服治疗各种家畜均可达到99.3～100%的杀虫效果。

3.5.2 剂量：因病畜种类不同和药物剂量不同其用药量也不尽相同。黄牛（奶牛）30mg/㎏（限重300㎏），水牛25 mg/㎏（限重400㎏），羊20 mg/㎏，猪60 mg/㎏，马属动物参照水牛或羊的剂量。

3.6 药物反应及处理

吡喹酮一次口服疗法治疗家畜血吸虫病，一般无副反应或轻微反应，副反应主要表现为反刍减少，食欲减退，瘤胃臌气，流涎，拉稀，心跳加快，精神沉郁，严重时可引起流产，也见有出现牛死亡的报告。

反应处理：一般轻微反应不需特殊处理，少数病例特别是老弱病畜或奶牛可能出现奶产量下降等反应，应加强观察，采用对症疗法，即可康复。