1.重组dna技术概论

1.1.概念

①自然界基因转移和重组：重组dna技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。自然界基因转移伴发重组有几种形式：位点特异的 重组、同源重组及转座重组。依赖整合酶、在两个dna序列的特异位点间发生的整合称位点特异的重组。发生在同源序列间的重组称为同源重组，又称基本重组医|学教育网搜集整理。

②重组dna技术：细菌的基因转移包括接合作用、转化作用和转导作用等（各概念详见课本）。在接合、转化、转导或转座过程中，不同dna分子间发生的共价连接即为重组。

克隆就是来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。获取同一拷贝的过程称为克隆化，也就是无性繁殖。为研究基因的结构与功能，从构建的基因组dna文库或cdna文库分离、增某一感兴趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又称重组dna技术。

1.2.基因工程基本原理一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取，克隆基因载体的选择与改造，目的基因与载体的连接，重组dna分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基 因的重组dna转化细胞。实现上述过程需要一些重要的工具酶，如限制性内切核酸酶连接酶等。限制性内切核酸酶是一类识别dna特意序列的内切核酸酶，它的 作用特异切开双链dna。

①目的基因的获取：外源基因又称目的基因，来源于几种途径：化学合成、酶促合成cdna，制备的基因组dna及pcr技术。

②基因载体的选择与构建：可作为基因载体的dna分子有质粒dna、噬菌体dna和病毒dna，它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。

③外源基因与载体连接：连接方式有：黏性末端连接、平端连接和人工接头连接等。

④重组dna导入宿主细胞：外源dna与载体在体外连接成重组dna分子，需将其导入宿主细胞。随受体细胞生长、增殖，重组dna分子得以复制、扩增。

⑤重组体的筛选：鉴定哪一菌落或嗜菌斑所含重组dna分子确实带有目的基因，即可得到目的基因的克隆，这一过程即为筛选或选择。

⑥克隆基因的表达：在原核或真核表达体系中进行表达，获得所需要的蛋白质。

2.基因工程与医学

（1）疾病基因的发现：不仅可以发现新的遗传疾病，而且对遗传病的诊断和治疗有着极其重要的意义。

（2）发展新药物：利用基因工程技术生产了许多有药用价值的蛋白质和多肽。

（3）dna诊断：又称基因诊断，是利用分子生物学及分子遗传学的技术和原理，在dna水平上分析、鉴定遗传性疾病所涉及的基因的置换、缺失或插入等突变。

（4）基因治疗：是向功能缺陷的细胞补充相应功能的基因，以纠正或补偿其基因缺陷，达到治疗目的。包括体细胞基因治疗和性细胞基因治疗。

（5）遗传病的防治：①产前诊断；②携带者测试基因；③症候前诊断；④遗传病易感性。