手术区的准备目的是消灭拟做切口处及其周围皮肤上的细菌。如皮肤上有较多油脂或胶布粘贴的残迹，可先用汽油或松节油拭去。对于非急症手术，若发现皮肤切口处有皮疹、毛囊炎、疖肿等炎症，应延期手术，以免刀口感染。

手术开始前，由洗好手的手术人员（一般是第一助手），用无菌卵圆钳夹持已浸泡消毒液的小纱布或棉球，用力均匀地涂擦消毒手术区皮肤，消毒范围至少要包括切口周围15cm的区域。如手术有延长切口的可能，则应事先相应扩大皮肤消毒范围。清洁刀口，由手术区中心部向四周涂擦；对于感染伤口或肛门区手术，则应自手术区外周涂向感染伤口或会阴、肛门处。已经接触污染部位的药液纱布，不应再返擦清洁处。