方法名称：

草乌甲素的测定—高效液相色谱法

应用范围：

本方法采用高效液相色谱法测定草乌甲素（C35H49NO10）的含量。

本方法适用于草乌甲素。

方法原理：

供试品经称取制成流动相溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长260nm处检测草乌甲素吸收值，计算出其含量。

试剂：

1.乙腈

2. 0.2%三乙胺水溶液（磷酸调pH值至3.1±0.1）

3. 磷酸

仪器设备：

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按草乌甲素峰计算应不低于 3000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：乙腈+0.2%三乙胺水溶液= 40+60

2.2 检测波长：260nm

2.3 柱温：室温

试样制备：

1. 称取供试品

精密称取本品试样20mg。

2. 对照品溶液的制备

精密称取草乌甲素对照品20mg，加流动相分别制成每1mL含0.02mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

将供试品用流动相稀释，制成每1mL含0.02mg的溶液，为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长260nm处测定草乌甲素的吸收值，计算出其含量。

参考文献：

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.373。