呈淡橙黄色结晶或薄片。约250℃变暗，不熔融而发生炭化。溶于热的稀盐酸和硫磺，略溶于乙酸，酚吡啶，氢氧化碱和碳酸碱溶液，微溶于甲醇，不溶于乙醇和丁醇，不溶于醚、丙酮、氯仿和苯。在25℃水中溶解度仅0.0016mg/mL，沸水中约溶1%，1g叶酸于10mL水中的悬浮液，pH为4.8-4.8。

但叶酸的钠盐极易溶于水，不过其钠盐溶于水后受光照会分解为喋啶和氨基苯甲酰谷氨酸钠。叶酸在空气中稳定，但受紫外光照射即分解失去活力。其在酸性溶液中对热不稳定，但在中性和碱性环境中十分稳定，100℃下受热1小时也不会被破坏。