为帮助大家顺利通过检验技师考试,医学教育网搜集整理了常用HE染色试剂配制方法,具体如下:
苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining),简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。
一、苏木素
(1)Harris苏木素液
配方:labdd.com
苏木精1g;无水乙醇10ml;蒸馏水200ml;钾明矾20g;HgO0.5g
先将苏木精溶于无水乙醇中,备用。把明矾放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木精,煮沸2分钟,先加入极少量的氧化汞(红色、黄色均可),防止氧化过程中液体剧烈沸腾外溢(最好选用比配制容积大一倍烧杯,烧杯比三角烧瓶更不容易外溢),玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。一定要注意开始时只能一点点加,直到液体不再剧烈沸腾了,才能增加加入的量,直至加完。加入氧化汞所用的时间和氧化汞溶解的程度、电炉的功率是此配方的关键,也是各人配出来染色效果各不相同的原因,具体要根据每人的习惯进行调整,同时也要根据气温而适当改变加热的时间,加热时间越长,氧化越快。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以5%的比例加入冰乙酸。如配好后时间较长,冰乙酸的量可适当多加一点。冰乙酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右。
(2)Gill改良苏木素液:
苏木精2g;无水乙醇250ml;硫酸铝17.6g;蒸馏水750ml;碘酸钠0.2g;冰乙酸20ml
先将苏木精溶于无水乙醇,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰乙酸。此液为半氧化进行性苏木素液,不会产生沉淀,氧化膜少,从理论上说染色不需要分化,但如果适当深染分化,染色效果更好。
配制此染液的关键在于碘酸钠的量。一、要根据季节气温的改变,适当调整碘酸钠的量,配方里碘酸钠的量一般只适用于夏天(室温25度),随着气温降低,氧化速度降低,可适当增加碘酸钠的量,室温每下降1度,碘酸钠增加0.01,最多不能超过总量的50%,过量的碘酸钠可使苏木素过氧化,不仅容易坏,而且核浆共染。二、称量一定要准确,很多单位配此染液总是染不上或染的很慢,主要是天平的精确度差,最好选择最小称量度在10mg以下的天平。三、应该观察碘酸钠是否在有效期内,是否潮解。
(3)Ehrlich苏木素液:
苏木精2g;无水乙醇100ml;甘油100ml;冰乙酸10ml;钾明矾2-3g;蒸馏水100ml
先将苏木精溶于无水乙醇,加甘油和冰乙酸待用。然后把钾明矾溶于蒸馏水,再注入待用的苏木精液,用玻棒搅匀,轻盖瓶口(可用棉花),置于日光下,经常开启瓶口并摇匀,约二个月后,颜色变褐色即可使用。
(4)Mayer改良苏木素液:
苏木精2g;无水乙醇40ml;硫酸铝钾100g;蒸馏水600ml;碘酸钠0.4g;冰醋酸20ml
稍加热将硫酸铝钾溶于蒸馏水中,同时将苏木精溶无水乙醇,再将二液混合,加入碘酸钠,充分溶解。此液也是进行性苏木素液,从理论上说染色不需要分化,但如果适当深染分化,染色效果更好。注意事项与Gill改良苏木素液相同。
二、伊红
(1)曙红(水溶性)
配方:曙红(水溶性)2.5g;蒸馏水500ml
水溶性依红酸化配制:
将曙红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%乙醇1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的乙醇1:1~2倍稀释,加入1~2%冰乙酸。
(2)伊红(醇溶性)
配方:伊红(醇溶性);2.5g95%乙醇;1000ml
最后加入冰乙酸几滴,起到促染作用。目前,国内依红偏酸,不仅不需要加冰醋酸,而且根据胞浆的等电点为pH4.7-5.0,应该用当量NaOH或冰醋酸将依红染液调至pH4.5左右。
三、盐酸乙醇分化液:浓盐酸0.5~1ml;75%乙醇99ml
四、清洗液:
30%盐酸或者用5%苯酚水溶液浸泡24小时,取出后充分水洗。此法可用于盖玻片或载玻片处理。
五、当量盐酸:
配制1N的HCL1000ml,需浓HCL多少ml?
82.8ml