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液体内沉淀试验:絮状沉淀试验

2017-06-02 16:48 医学教育网
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絮状沉淀试验为历史较久,又较有用的方法。该法要点是:将抗原与抗体溶液混合在一起,在电解质存在下,抗原与抗体结合,形成絮状沉淀物。医学教/育网搜集整理这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响,因而产生了两种最适比例的基本测定方法。

(一)抗原稀释法

抗原稀释法(Dean-Webb法)是将可溶性抗原作一系列稀释,与恒定浓度的抗血清等量混合,置室温或37℃反应后,产生的沉淀物随抗原的变化而不同。以牛血清白蛋白为例的实验结果。

Dean-Webb定量沉淀试验

管号 抗原 抗体 总沉淀量 反应过剩物 抗原沉淀量 抗体沉淀量 沉淀中Ab/Ag
1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.0
2 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.0
3 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.7
4 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.1
5 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.8
6 0.043 0.68 0.734 0.043 0.691 16.1
7 0.064 0.68 0.720 Ab
8 0.085 0.68 0.601 Ag
9 0.171 0.68 0.464 Ag
10 0.341 0.68 0.368 Ag

(二)抗体稀释法(Ramon法)

本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应,计算结果同上法,得出的是抗体结合价和最适比。

方阵最适比测定

抗体稀释度 抗原稀释度
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/12 对照  
1/5 ++ +++ +++ ++ ±
1/10 ++ ++ ++ +++ ++
1/20 ++ ++ +++ ++
1/40 ± ++ +++ ++
1/80

"+"为沉淀物量:为最适比

现今,为了取得抗原与抗体的最佳比例,已将以上两法相结合,即抗原和抗体同时稀释,称为棋盘格法(亦称方阵法),找出最佳配比。

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