主管检验师:《答疑周刊》2018年第41期:
1.【问题】ONPG是什么意思?
【解答】β-半乳糖苷酶试验(ONPG试验)
(1)原理:有的细菌可产生β-半乳糖苷酶,能分解邻硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的-硝基酚(O-nitrophenol),在很低浓度下也可检出。
(2)试剂:0.75M ONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸馏水中,在加入缓冲液(6.9gNaH2PO4,溶于45ml蒸馏水中,用30%NaOH调整pH为7.0,再加水至50ml)5ml,置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液为无色,如出现黄色,则不应再用。
(3)方法:从培养基上取菌,于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液,加入一滴甲苯并充分振摇,使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟,加入0.25ml ONPG试剂,水浴20分钟~3小时观察结果。
(4)结果:菌悬液呈现黄色为阳性反应,一般在20~30分钟内显色。
(5)应用:迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性,而不发酵乳糖的细菌为阴性。本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。
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