【摘要】目的：探讨检测恶性胸腔积液（MPE）患者外周血（PB）和胸水（PE）中T淋巴细胞亚群（TLS）的意义及化疗前后TLS的变化。方法：对比良性胸腔积液（BPE）、MPE患者外周血和胸水及健康正常人外周血中TLS的水平；对比MPE患者外周血和胸水中TLS的水平；对比MPE患者化疗前、后外周血和胸水中TLS的水平。结果：TLS在胸腔积液患者外周血和胸水中分布相似；MPE患者外周血中CD8+T细胞水平高于正常人（30.6±2.4vs20.9±1.8，P<0.05），CD4+T细胞相仿，CD4+/CD8+低于正常（1.78±0.21vs2.71±0.35，P<0.05）；与BPE患者相比，MPE患者外周血和胸水中CD4+T细胞、CD4+/CD8+较低（P<0.05），而CD8+T细胞较高（P<0.05）；化疗后MPE患者外周血和胸水中CD8+T细胞水平明显降低（30.6±2.4vs24.7±2.3，31.6±2.4vs21.9±4.1，P<0.05），CD4+/CD8+明显升高（1.78±0.21vs2.19±0.19，1.69±0.30vs2.62±0.40，P<0.05）。结论：检测外周血可以了解胸水中TLS水平；检测外周血和胸水中TLS水平有助于BPE和MPE的鉴别；化疗可部分改善MPE患者的细胞免疫抑制状态。

　　【关键词】胸腔积液；T淋巴细胞；CD4；CD8

　　引言

　　肿瘤的发生、发展与细胞免疫功能降低密切相关，T淋巴细胞在其中起中心调控作用［1］。为比较良性胸腔积液（benignpleuraleffusion，BPE）和恶性胸腔积液（malignantpleuraleffusion，MPE）患者的T淋巴细胞亚群（TLS）分布水平及对原发病的诊断价值，和化疗对其影响，我们选择BPE，MPE患者的胸腔积液和外周血及正常健康人外周血进行TLS检测。

　　1.对象和方法

　　1.1　对象诊断明确MPE32（男21，女11）例，平均年龄57.9岁，鳞腺癌4例，腺癌28例；BPE（结核性）29（男17，女12）例，平均年龄45.7岁；正常对照组选自体检合格、肝、肾、肺功能完全正常健康人27（男14，女13）例，平均年龄34.2岁。患者于治疗前行胸腔穿刺术，收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.MP患者经NP方案化疗2个周期后（盖诺25mg/m2ivd1，d8；DDP40～50mgd1～3，21d为一周期），收集胸腔积液，同时抽取静脉血10mL.采集体检正常健康人静脉血10mL.

　　1.2　方法胸腔积液用200μm尼龙网过滤组织于离心管；加入5mLRPMI；18℃，200g离心10min，去除上清液，混悬细胞沉淀于20mLRPMI，重复离心1次，重混悬细胞沉淀于5mLRPMI，加入PBS冲洗细胞，室温下，200g离心10min，去除上清液。重复此步骤。混悬细胞沉淀于适量RPMI备用。用台盼蓝计数活细胞百分率。将肝素化的新鲜去红细胞混悬液室温下加入等量PBS混匀，每10mL去红细胞混悬液/PBS混悬液中加入3mLFicollHypaque液。18℃，900g，离心30min.移除上层的血浆和血小板，缓慢的转移中层的单个核细胞层到锥形管，用3倍体积的HBSS洗涤细胞，18℃，490g，离心10min.去除上清液。用HBSS重新混匀细胞、洗涤并离心1次，去除上清液。混悬细胞于RPMI备用。用台盼蓝计数活细胞百分率。计数外周血和胸腔积液淋巴细胞，用RPMI调整细胞度至2.5×109/L，将l06淋巴细胞悬于100μLHanks缓冲液（含1g/L牛血清蛋白、0.1g/L叠氮钠）中，分别与20μL抗CD3APC（UCHT1）、抗CD4FITC（RPAT4）及抗CD8Cychrome（RPAT8）mAb或相应IgG对照蛋白（均购自美国BDPharmingen公司）于4℃孵化30min，Hanks缓冲液洗涤2次，5g/L多聚甲醛固定。24h内用FACStarPlus流式细胞仪检测CD3，CD4，CD8细胞，计算CD4/CD8比值。

　　统计学处理：用SPSS10.0统计软件，数据以x±sx表示。组间比较用MannWhitneyU检验。组内前后比较用Wilcoxon signedrank检验。

　　2.结果

　　2.1　T细胞亚群的差异MPE患者外周血（PB）CD3+，CD8+T细胞高于正常人对照组（P<0.05），CD4+T细胞相仿（P>0.05），CD4+/CD8+低于正常人对照组（P<0.05）；BPE患者PBCD3+，CD4+，CD8+均高于正常人对照组（P<0.05），CD4+/CD8+相仿（P>0.05）。BPE，MPE患者PBCD3+T细胞相仿（P>0.05），前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T细胞低于后者（P<0.05）。BPE，MPE中CD3+T细胞相仿（P<0.05），前者CD4+T细胞、CD4+/CD8+高于后者，而CD8+T细胞低于后者（P<0.05）。患者外周血和PE中TLS分布相似（P>0.05）（表1）。

　　2.2　化疗后TLS的变化MPE患者化疗前、后PB和PE中CD3+，CD4+T细胞无明显变化（P>0.05），而CD8+T细胞明显降低，CD4+/CD8+明显升高（P<0.05，表2）。表1胸腔积液患者/正常人T细胞亚群（略）表2恶性胸腔积液患者化疗后T细胞亚群变化变化（略）医学教育网搜集整理

　　3.讨论

　　MPE患者外周血CD3+，CD8+T细胞百分率明显高于健康人，CD4+细胞无明显差异，CD4+/CD8+比值明显低于健康人。提示MPECD4+/CD8+比值降低是由于CD8+细胞增高所导致，反映了MPE患者的细胞免疫功能处于抑制状态。而BPECD3+，CD4+，CD8+T细胞百分率均高于健康人，CD4+/CD8+比值无明显差异，反映了BPE患者的细胞免疫功能处于激活状态。在外周血和胸腔积液中，两者的CD3+T细胞百分率相似，但MPE患者的CD4+T细胞百分率、CD4+/CD8+比值低于BPE患者，CD8+T细胞百分率高于BPE患者。提示检测外周血或胸腔积液中TLS，有助于临床上对BPE，MPE患者的鉴别诊断。MPE患者的外周血和胸腔积液中CD3+，CD4+，CD8+TLS百分率和CD4+/CD8+比值均相似，说明胸腔积液和外周血的分布水平非常接近，T细胞释放到外周血和分配到胸膜腔的水平有关，通过外周血TLS的检测可反映出胸腔积液T淋巴细胞水平。化疗后CD8+T细胞明显降低，CD4+/CD8+明显升高，而CD3+，CD4+T细胞无明显变化。提示常规化疗后肿瘤细胞大量坏死或凋亡，肿瘤负荷减少而使免疫抑制因子减少，可部分改善患者的细胞免疫抑制状态，但细胞免疫功能紊乱并未得到完全纠正。

　　CD4+T细胞（Th）可分泌IL2，TIFN等细胞因子，并诱导或促进自然杀伤（NK）细胞等多种细胞毒性细胞的活性，共同发挥抗肿瘤作用［2］。CD8+T细胞（Ts）则抑制机体的免疫功能，与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。恶性胸腔积液患者肿瘤细胞负荷增加，分泌免疫抑制因子增多，在抑制T淋巴细胞增殖、分化过程中造成Ts，Th细胞水平的增、减，以有利于肿瘤在宿主的转移［3］。因此，细胞比值是反映细胞免疫平衡状态的敏感性指标，本研究结果提示恶性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下、紊乱；T淋巴细胞亚群的测定对恶性胸腔积液的诊断及疗效评估有一定价值；外周血中T淋巴细胞的检测可以反映胸腔积液中T淋巴细胞分布水平。并提示在有效化疗杀伤癌细胞的同时，应辅助以免疫调节治疗，从而提高患者的细胞免疫功能，更有利于延长患者的生存期并改善其生存质量［4-5］。

　　【参考文献】

　　［1］萧剑军，何洁冰，何庭宇，等。中晚期肺癌患者T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能检测及临床意义［J］。广东医学院学报，2002，20（1）：15-16。

　　［2］ Sigstad E， Dong HP， Nielsen S， et al. Quantitative analysis of integrin expression in effusions using flow cytometric immunophenotyping［J］。 Diagn Cytopathol， 2005，33（5）： 325-331。

　　［3］ Chen YQ， Shi HZ， Qin XJ， et al. CD4+CD25+ regulatory T lymphocytes in malignant pleural effusion［J］。 Am J Respir Crit Care Med， 2005， 172（11）： 1434-1439。

　　［4］ Dalbeth N， Lee YC. Lymphocytes in pleural disease［J］。 Curr Opin Pulm Med， 2005，11（4）： 334-339。

　　［5］ Ahmed S， Shahid RK， Rimawi R， et al. Malignant pleural effusions in lymphoproliferative disorders［J］。 Leuk Lymphoma，2005，46（7）： 1039-1044。