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DNA的粗提取与鉴定实验的改进

2008-08-27 17:56 医学教育网
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  1、实验原理

  鸟类血液中红细胞有细胞核,细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。利用DNA在0.12-0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低,可使溶液中的DNA形成沉淀析出,通过过滤,得到初提取的DNA.再利用DNA不溶于酒精溶液,而细胞中其他物质可溶于酒精的特点,进一步提取含杂质较少的DNA. DNA遇二苯胺,加少许乙醛,沸水浴中显蓝色,利用这一原理可对DNA进行鉴定。

  2、方法步骤及改进,实验的关键步骤

  本实验成功的关键,是保证提取到足量且较纯净的DNA.因为DNA在细胞中含量少,所以在下列步骤中应特别注意:在步骤1中使用的鸡血的量要在150ml左右。提取细胞核物质时要充分搅拌5min以上。在步骤4中加蒸馏水要控制好量,同时用竹筷缓缓搅动使DNA聚集其上。在步骤5要充分搅拌,在步骤7中应使用冷却的酒精(至少在5℃以下存放24h)。因为DNA易吸附在玻璃容器上,所以实验中最好使用塑料烧杯和试管,以减少DNA的损失。同时为了能在DNA鉴定步骤中较快、较好地出现蓝色,可将相应的NaCl溶液量和二苯胺试剂量都减少一半左右。

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