【关键词】  脑缺血； 肺； 胃； 死亡率； 病理学； 大鼠

　　溶栓治疗是急性脑梗死恢复脑血流、挽救缺血脑组织的有效方案，但溶栓后灌注压的提高可引起脑出血；且由于全身纤溶系统的激活，造成其他组织器官的出血和损伤；血栓溶解可释放致热原引起发热反应。因此，脑缺血再灌注常并发外周器官损伤，从而加重原有脑部病灶的损伤，引起多器官受损衰竭，甚至导致死亡［1~3］。外周器官受损中以应激性溃疡和间质性肺炎为特点的肺、胃组织损伤在临床常见，积极防治脑缺血再灌注引起的肺、胃组织损伤具有重要意义。我们的前期研究表明，中药可防治脑缺血再灌注肺、胃组织损伤，提高脑梗死的整体治疗水平［4~6］。本研究从中药复方脑脉通联合溶栓治疗对脑缺血肺、胃组织损伤的保护作用方面探讨其通过减轻脑缺血再灌注外周器官的损伤，以增加溶栓治疗的安全性，从而增强其溶栓效果的作用。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验材料  SD大鼠，清洁级，3～4月龄，260只，雌雄各半，体质量（300±50）g，由河南省实验动物中心提供（合格证号：410117）；聚乙烯导管，武进市政平乳胶制品厂产品，型号F2×70，外径0.7 mm；尼龙线，日本大东阳公司产品，型号2.5，直径0.285 mm；凝血酶，济南军区生物制品药物研究所产品，批号H41023661，规格500 U/支；尿激酶，山东新华制药股份有限公司产品，批号05401236，规格1万U/支；脑脉通颗粒（由大黄、川芎、人参、葛根等组成），河南中医学院药物分析学科提供。

　　1.2  分组与处理  大鼠随机分为假手术组、模型组、用药组，用药组又分为尿激酶溶栓组（简称溶栓组）、脑脉通组、脑脉通加尿激酶溶栓组（简称联合组），除假手术组外，其余各组根据脑缺血后干预时间点的不同分为3 h、6 h和9 h组，每组20只动物。各组大鼠均于造模前4 d灌胃（1次/d），联合组和脑脉通组用脑脉通灌胃（用量为81 mg/kg），其余均灌以等体积的生理盐水。另外，模型组用生理盐水，溶栓组与联合组用尿激酶，分别于脑缺血后不同时间点经导管进行区域动脉给药，尿激酶用量5 000 U/kg.

　　1.3  造模及取材  自体血栓结合线栓阻塞大脑中动脉制备血栓栓塞性脑缺血动物模型［7，8］，留置导管。区域动脉给药后24 h观察大鼠神经症状，冰盘上取脑，制备标本，待行指标测定。

　　1.4  观察指标

　　1.4.1  大鼠死亡率  区域动脉用药后苏醒大鼠至取材时，死亡只数与总体大鼠（动脉用药后死亡和存活的总数）的比率。

　　1.4.2  颅内和胃出血率  动脉用药后大鼠尸检、存活大鼠裸眼观察及光镜下病理损伤见出血者统计例数，分别计算脑和胃出血只数与总只数的比率。

　　1.4.3  脑和肺及胃组织病理观察  切取缺血侧脑组织和左肺及胃窦，分别用10%的中性福尔马林液固定，常规脱水，透明，浸蜡，包埋，切片，染色。光镜下观察病理形态改变。受损程度由轻到重进行分级。分级标准（镜下见出血者均为Ⅳ级）［9，10］：Ⅰ级0～25%，Ⅱ级26%～50%，Ⅲ级51%～75%，Ⅳ级＞75%.观察不同分级的大鼠例数。

　　1.4.4  脑梗死面积  切取的脑组织放入2%四氮唑溶液，37 ℃水浴锅温孵30 min后放入10%甲醛溶液，15 min后取出脑组织，用数码相机对脑片（额侧）进行拍照，应用计算机软件测定脑片梗死面积与相应侧总面积，计算面积比值。计算公式：面积比值（％）=梗塞面积/总面积×100.

　　1.4.5  肺组织含水量  取右侧肺组织，迅速用电子天平称取湿质量（精确度为0.1 mg）后放入干燥箱中干燥（100±2）℃，24 h后称取干质量。计算公式：肺组织含水量（%）=（肺湿质量－肺干质量）/肺湿质量×100.

　　1.5  统计学方法  数据用SPSS 11.0统计软件处理。等级资料用秩和检验；相对数用Fisher精确检验法；计量资料以x±s表示，行单因素方差分析。

　　2  结果

　　2.1  大鼠死亡率  分组是均衡的，但两次操作，大鼠的死亡数不同，各组计算死亡率的总例数包括了3个时间点的总只数。脑缺血大鼠死亡率较假手术组高（P＜0.01）；脑脉通组和联合组均较模型组低（P＜0.05）；联合组明显低于溶栓组（P＜0.05）。见表1.

　　2.2  大鼠颅内和胃出血率  因为脑组织的取材要求严格，如果动作慢一点，取脑时间超过2 min，视为不合格取材，要剔除，45只大鼠取材合格。取胃的大鼠只数比脑组织多，其中包括大鼠死亡后即可进行尸体解剖观察的只数。脑缺血大鼠颅内和胃出血率高于假手术组（P＜0.01）；联合组均较模型组低（P＜0.05）；联合组明显低于溶栓组（P＜0.05）。见表2、表3.

　　表1  各组大鼠死亡率（略）

　　Table 1  Rat mortality in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　表2  各组大鼠脑组织出血率（略）

　　Table 2  Rat brain hemorrhage ratio in each group

　　*P＜0.05， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　表3  各组大鼠胃组织出血率（略）

　　Table 3  Rat stomach hemorrhage ratio in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs thrombolysis plus Naomaitong group.

　　2.3  脑梗死面积  动物只数是所有取材合格后再剔除测量不合理的动物，最后纳入统计的只数，是每个分组的数目。模型组各时间点大鼠脑梗死面积均较假手术组大（P＜0.01）；各相应时间用药组大鼠脑梗死面积均明显小于模型组（P＜0.01）；各组6 h和9 h组均较3 h组增加，用药组9 h较6 h增高（P＜0.01）；联合用药6 h和9 h组脑梗死面积明显小于相应时间的溶栓组和脑脉通组（P＜0.01）。见表4.

　　2.4  肺组织含水量  模型组各时间点肺含水量均明显高于假手术组（P＜0.01）；各用药组大鼠不同时间点肺含水量均低于相应时间点模型组（P＜0.01， P＜0.05）；联合组9 h的肺含水量低于溶栓组和脑脉通组（P＜0.05）；各组6 h和9 h的肺含水量均较其3 h组增加，9 h也分别较其6 h增加（P＜0.01， P＜0.05）。见表4.

　　表4  各组大鼠脑梗死面积和肺组织含水量变化（略）

　　Table 4  Rat brain infarct size and lung water content in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， ▲▲P＜0.01， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， □□P＜0.01， vs 3 h of the same group； ■P＜0.05， ■■P＜0.01， vs 6 h of the same group.

　　2.5  脑组织病理改变  模型组各时间点大鼠脑组织病理损伤均较假手术组明显（P＜0.01）；各用药组大鼠均较相应时间模型组轻（P＜0.01）；各组9 h病理损伤均较3 h明显（P＜0.05）；联合用药组3 h和9 h较相应时间溶栓组和脑脉通组损伤轻（P＜0.05）。见表5.n为每一个组进行显微镜下观察的病理切片数。

　　2.6  胃组织病理损伤  各模型组胃组织病理损伤均较假手术组明显（P＜0.01）；除溶栓组9 h外，其余各用药组大鼠胃组织病理损伤均较模型组轻（P＜0.01）；模型组和溶栓组9 h较3 h加重（P＜0.05）；联合组9 h较溶栓组轻（P＜0.05）。见表6.n为每一个组进行显微镜下观察的病理切片数。

　　2.7  肺组织病理改变  模型组各时间大鼠肺组织病理损伤均较假手术组明显（P＜0.05， P＜0.01）；各用药组6 h和9 h均较相应时间模型组的损伤轻（P＜0.05）；联合组9 h的肺组织损伤较溶栓组轻（P＜0.05）；模型组9 h和6 h以及各用药组9 h的损伤分别较3 h加重，除脑脉通外，各组9 h的损伤均较其6 h明显（P＜0.05， P＜0.01）。见表6.

　　表5  各组大鼠脑组织病理损伤分级（略）

　　Table 5  Rat brain pathological change in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， vs 3 h of the same group.

　　表6  各组大鼠胃和肺组织病理损伤分级（略）

　　Table 6  Rat stomach and lung pathological changes in each group

　　**P＜0.01， vs shamoperated group； △P＜0.05， △△P＜0.01， vs untreated group； ▲P＜0.05， ▲▲P＜0.01， vs the corresponding thrombolysis plus Naomaitong group； □P＜0.05， □□P＜0.01， vs 3 h of the same group； ■P＜0.05， vs 6 h of the same group.

　　3  讨论

　　急性脑血管疾病常常继发心肌梗死、肺水肿、急性胃黏膜病变、肾功能衰竭等器官损伤。急性脑梗死引起脑水肿发生，颅内压增高，影响到下丘脑，使神经体液发生紊乱，出现一系列的应激反应，更易诱发或加重外周器官的功能衰竭［2， 11， 12］。由急性脑梗死引起的外周器官功能损伤甚至衰竭可导致连锁反应，发生多器官功能损伤甚至衰竭，使其死亡率更高，救治极为困难，严重威胁患者的生命及其预后。肺水肿和肺炎是急性脑梗死常见的并发病症。脑缺血早期可导致肺损伤，损伤后肺组织可出现典型的病理改变，表现为肺间质充血或出血，肺泡腔内有少量浆液性渗出及较多的吞噬细胞［13~15］。脑梗死多发于老年人，其肺脏组织形态和功能衰退，当发生脑梗死时容易导致肺组织损伤。因此，积极治疗老年人脑梗死的同时，防治由其导致的肺脏病变，对于提高脑梗死的整体治疗水平具有实际意义［9］；此外，由急性脑梗死引起的外周器官损伤中，胃损伤的发生率较高。脑梗死后，病变累及下丘脑自主神经及其脑干下行通路，使迷走神经功能亢进，胃液分泌增加，胃肠蠕动加快，内脏血管舒缩障碍，胃肠黏膜缺血而出现应激性溃疡，典型的损伤表现为胃缺血和胃出血，而且胃功能的损伤和衰竭可加重原有脑部病灶的损伤，引起机体各器官受累，容易导致死亡［2， 3］。我们前期的研究表明，中医药对脑缺血外周器官肺、胃组织的损伤具有保护作用［4， 6］。迅速再通血管、恢复血流是溶栓治疗最基本的治疗方法，但溶栓治疗可引起上消化道出血，使胃的损伤加重［16， 17］。因此，寻求能够溶解血栓、减轻或消除脑缺血再灌注外周器官损伤的有效方药，具有重要意义。研究显示，脑缺血可引起肺、胃组织病理损伤，肺含水量增加，且随着缺血时间的延长，损伤呈加重趋势；脑脉通和溶栓治疗对脑缺血脑组织和肺及胃损伤均具有不同程度的保护作用，但以二者联合的作用更为明显，脑脉通联合溶栓治疗可明显降低大鼠死亡率、颅内和胃出血率，减小脑梗死面积，减轻脑、肺和胃组织病理损伤，减轻肺水肿，其确切的作用机制有待进一步探讨。

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