【摘要】  目的 探索三叶虫茶对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法 8%的醋酸灌肠大鼠建立溃疡性结肠炎动物模型，24 h后给药，连续14天，观察大鼠毛色、粪便、体重变化情况。造模第14天，观察大鼠结肠病理组织学损伤情况，计算结肠黏膜损伤指数（CMDI）。结果 模型组大鼠溃疡形成，阳性对照组和给药组大鼠的CMDI等指标均明显改善（P<0.01）。结论 三叶虫茶能明显减少炎细胞浸润，对大鼠溃疡性结肠炎有明显的抵抗作用。

　　【关键词】  三叶虫茶；提取物；溃疡性结肠炎；动物模型

　　Effect of the extract from Sanye Chongcha （an excrement of black rice worm，aglossa dimidiata）  on rat‘s colonitis

　　XU Guang-ming，WEN Li-zhang，LIN Yan，et al.Faculty of Pharmacetics，TCM University of Hunan，Changsha 410007，China

　　［Abstract］  Objective  To explore the effect on rat‘s colonitis of excrement of aglossa dimidiata that generally is called Chongcha or Sanye Chongcha in Chinese，which means tea manufactured from insect excrement or “insect-tea”。Chinese have favored Chongcha for some centuries for its medicinal properties.Methods  The rat’s colonitis was induced by 8% acetic acid.Twenty hours later，the rats were given the medicine  and the hair color and   stool  had been observing for two weeks.The mucosal damage index（CMDI） and histopathology of the colon were observed on the 21st day.Results  Distinct colonitis was observed in the model groups.CMDI and  other index were significantly improved in the  medicine groups（P<0.01）。Conclusion  Treatment with  the extracted aglossa Dimidiata shows beneficial effects on rat ulcerative colonitis.

　　［Key words］  sanye chongcha；insect excrement；ulcerative colonitis；animal model

　　用三叶海棠叶饲喂米缟螟（aglossa dimidiata）幼虫，然后取其排泄物作药用或茶用，在我国湖南，广西一带民间已流传数百年之久，当地也称之为“虫茶”。从明代李时珍著《本草纲目》（1578年）至今许多学术专著对虫茶均有记载。三叶虫茶是我国的土特产，是热带、亚热带地区高温作业人员的重要饮料。喝虫茶不仅清凉甘美，而且有很好的医疗作用。伍菊英［1］报道了对溃疡性结肠炎的治疗；文礼章等对三叶虫茶的生物安全性及化学成分等展开了许多研究［2，3］。本实验开展了虫茶提取物抗大鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colonitis，UC）的初步研究，为进一步研究虫茶治疗溃疡性结肠炎的有效部位或有效成分，探索利用三叶虫茶作为新一代抗溃疡性结肠炎中草药提供重要依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  仪器  800型离心机（上海手术仪器厂），SHZ-D循环水式真空泵（巩义英屿华仪器厂），B5 professional seriers生物显微图像采集系统（麦克奥迪有限公司），Finesse-325切片机（广州华俊医疗器械有限公司）。

　　1.2  材料  三叶虫茶（湖南农业大学昆虫研究所提供）、大鼠（湖南中医药大学动物中心）、丙酮（A.R）、冰醋酸（A.R）、生理盐水、蒸馏水、柳氮磺吡啶片（上海福达制药有限公司，批号：C60903）。

　　1.3  方法

　　1.3.1  三叶虫茶提取物及阳性对照液的制备  （1）虫茶水提物样品液：称取 56 g 虫茶，用10倍体积的新沸蒸馏水，80 ℃回流提取30 min，抽滤，滤渣同法再提取1次，合并2次滤液，80 ℃水浴浓缩至280 ml.同法再提取1次，合并2次滤液，浓缩至280 ml，即得虫茶水提液（含生药0.2 g/ml）。（2）虫茶丙酮提取物样品液：称取56 g虫茶，用10倍体积80％的丙酮，80 ℃回流提取30 min，抽滤，滤渣同法再提取1次，合并2次滤液，减压回收丙酮，直到所有的丙酮回收完，再用新沸的蒸馏水定容到280 ml，即得虫茶丙酮提取物溶液（含生药0.2 g/ml）。（3）阳性对照液：将柳氮磺吡啶片按人与动物剂量关系，用蒸馏水溶解，制成83 mg/ml的柳氮磺吡啶溶液。

　　1.3.2  大鼠模型的制备  参照Zahavi等［4］学者造模方法，取（200±20）g大鼠50只，分成空白组、模型组、水提物组、丙酮提取物组和阳性对照组，每组均为10只。实验前，各组大鼠48 h禁食不禁水，然后乙醚麻醉，将导管经肛门插进8cm.空白组：注入1 ml生理盐水，大鼠头部朝下，肛门朝上手托20 s后，再注入2 ml生理盐水冲洗1次；模型组和给药组：将导管经肛门插进8 cm，注入1 ml 8％ 醋酸，余同空白组操作。

　　1.3.3  给药方法  造模24 h后，空白组和模型组给水灌胃，其余3组按1 ml/100 g体重，分别用阳性对照液、水提物液、丙酮提取物液灌胃给药，每日1次，连续14天。

　　1.4  检测指标  造模及用药期间每日观察实验大鼠的毛发光泽度、大便性状等情况和体重变化。用药14天后处死全部动物，观察结肠肠壁膨胀、肠壁外周粘连，糜烂面等情况。用甲醛溶液固定结肠组织，常规石蜡包埋、切片、HE染色，用显微镜观察。

　　1.5  统计学方法  采用统计软件SPSS 12.0行配对t检验。

　　2  结果

　　2.1  肉眼观察  观察结果如表1.从表1中看出，毛色及粪便：模型组大鼠毛色枯黄，粪便变稀。水提物组随着灌胃给药的进行，毛色日渐变得油光发亮，恢复健康毛色，粪便由稀便变成颗粒状粪便。丙酮提取物组，阳性药物组，有同样的转变，在时间顺序上，先是阳性药物组，其次为丙酮提取物组，最后是水提物组。而空白组大白鼠始终是毛色健康，有一定的光泽，粪便成颗粒状。体重：14天后，除模型组，各给药组体重都有增加，但增加程度不同。肉眼观察实验中，阳性药物组的大鼠药效最好，其次为丙酮提取物组，最后为水提物组。表1  给药期间大鼠情况

　　2.2  解剖观察  模型组：全部大白鼠肠壁膨胀巨大变薄，肠壁外周粘连严重，肠壁黏膜组织坏死，结肠水肿明显，糜烂面上有黑黄色膜状物附着；空白组和阳性药物组：结肠有一定的弹性，肠管黏膜皱襞纹理清晰，未见糜烂和溃疡；给药组与模型组比，结肠有明显好转，大部分已经恢复正常，有一定的弹性，只有少数肠管变粗，肠壁有些膨胀巨大变薄，但无明显糜烂溃疡。总体来说，丙酮提取物组优于水提物组。

　　2.3  结肠切片观察结果  结肠病理组织切片见图1.观察结果：空白组结肠组织正常，腺体中杯状细胞显著。模型组黏膜高度充血、水肿、上皮溃疡形成，局部坏死、大量炎性细胞浸润，大范围的肠上皮坏死，腺体中杯状细胞显著减少。阳性对照组腺体中杯状细胞显著，炎细胞浸润。水提物组炎细胞浸润，黏膜上皮修复，黏膜修复，肉芽组织增生明显。丙酮提取物组炎细胞浸润明显轻微，黏膜上皮修复，部分上皮组织再生，上皮溃疡坏死明显减轻，炎性细胞浸润亦有所缓解。

　　2.4  结肠黏膜损伤评价  本文结肠黏膜损伤指数（CMDI）的半定量标准参照Vilaseca等［5，6］学者的评分标准加以调整而建立，见表2.根据该标准，对各实验组结肠病理组织切片综合评分，用统计软件SPSS 12.0 配对t检验，结果见表3.统计表明，水提物组和丙酮提取物组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；与阳性对照组比差异无统计学意义（P＞0.05），由此说明给药组能明显抵抗结肠溃疡的形成，对结肠溃疡有明显治疗作用。表2  结肠黏膜损伤评分标准表3  各组CMDI的比较 注：与模型组比较，*P<0.01；与阳性对照组比较，△P>0.05

　　3  讨论

　　本实验采用溃疡性结肠炎醋酸化学法动物模型，造成的急性UC损伤模型，具有造模时间短、容易复制、结肠损伤（粪便变化、毛色变化、体重变化、溃疡、糜烂、淋巴细胞浸润程度）明显的特点，适合于新药的筛选研究［7］。实验发现，三叶虫茶的水提物和丙酮提取物能明显抵抗UC的产生，粪便变化、毛色变化、体重变化、溃疡、糜烂、淋巴细胞浸润等各项指标均明显改善，说明三叶虫茶能抵抗UC的形成，对UC有一定治疗作用。实验中丙酮提取物的效果稍好，其原因有待进一步开展研究。

　　溃疡性结肠炎（UC）是一种病因尚未完全清楚的炎症性肠病，其临床主要表现为腹痛、腹泻、脓血便。从已有的报道看，参与UC发病机制的因素有免疫、遗传、环境、自由基损伤等。UC时，肠黏膜中大量吞噬细胞耗氧量增加，通过一系列反应，产生大量氧自由基O-   .、OH-及脂质过氧化物（ROO-）等，他们在引起脂质氧化的同时，可增加黏膜的通透性，使吞噬细胞活动进一步加强，产生更多的氧自由基，从而导致组织细胞的损伤，损伤肠黏膜［8］。三叶虫茶中含有多酚类物质［2］，其水提物或丙酮提取物含大量的多酚类物质，多酚类物质具有很强的抗氧化活性，是人体自由基的清除剂［9，10］。及时清除氧自由基，可降低肠黏膜组织细胞的损伤。本文为三叶虫茶治疗UC的初步研究，尚需大量的工作来证实三叶虫茶中的有效成分。

　　【参考文献】

　　1 伍菊英。三叶虫茶治疗溃疡性结肠炎31例疗效观察。湖南中医学院学报，1997，17（3）：27-28.

　　2 文礼章。三叶虫茶的生物安全性及其主要化学成分分析。湖南农业大学学报，1996，22（6）：574-579.

　　3 文礼章。三叶虫茶的安全性毒理学评价。中国食品学报，2004，4（2）：83-87.

　　4 Zahavi I，Avidor I，Marcus H，et al.Effect of sucralfate on experimental colitis in the rat.Dis Colon Rectum，1989，32（2）：95-98.

　　5 Vilaseca J，Salas A，Guarner F，et al.Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.Gut，1990，31：539-544.

　　6 杨孝来，吴勇杰，葛斌。大鼠乙酸性结肠炎模型的实验研究。兰州大学学报（医学版），2005，31（1）：5-8.

　　7 O‘keefe SJD，Haymond MW，Benmet UM，et al.Long acting somatostatin analogue therapy and protein metabolism in patients with jejwnostomies.Gastroenterology，1994，107：379-388.

　　8 Zhu F，Qian JM，Pan GZ.The establishment to TNBS induced experimental colitis.Acta Acad Med Sin，1998，20（4）：271-277.

　　9 Salah N，Miller NJ，Pagansa G，et al.Polyphenolic flavanols as scavengers of B.Queous phasemdicals and as chain-breaking antioxidants.Arch Biochem Biophys，1995，322（2）：339-346.

　　10 Guo Q，Zhao B，Li M，et at.Studies on proteedve mechanisms of four components of green tea polyphenols against lipid peroxidation in synaptosomes.Biochem Biophys Acta，1996，1304（3）：210-222.