一：六一散含量测定方法

　　六一散处方为：滑石粉600g，甘草100g.

　　2005《中国药典》六一散含量测定项下：

　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵1.725g，加水300ml使溶解，用磷酸调节ph值至3.5）（65：35）为流动相；检测波长为250nm.理论板数按甘草酸峰计应不低于3000.

　　供试品溶液的制备：取本品约1.5g，精密称定，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率33khz）30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　文献报道的以甘草酸单铵为指标的，如：陈建华等用hplc法测定六一散中甘草酸单铵的含量，高效液相色谱仪为waters 510/ 484/ 75b 色谱系统。采用hypersil c18 （4.6×150，5μ） 分析柱，流动相为甲醇-含3 %冰醋酸的0.2mol/ l醋酸铵溶液（62：38），流速1.2ml/min，检测波长250nm，柱温室温。样品用流动相超声处理，结果甘草酸单铵的线性范围1.6～8μg， 平均加样回收率为99.4%.

　　二：六应丸含量测定方法

　　六应丸处方为：丁香，蟾酥，雄黄，牛黄，珍珠，冰片。

　　2005《中国药典》六应丸含量测定项下：

　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液（50：50）（用磷酸调节ph值至3.2）为流动相；检测波长为296nm.理论板数按华蟾酥毒基峰计应不低于9000.

　　供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.3g，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，加热回流1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　文献报道的以华蟾蜍毒基为指标的，如：黄东亮等应用HPLC法测定六应丸中蟾毒内酯的含量，岛津LC-10A型高效液相色谱仪，色谱柱为250mm×416mm，固定相为Spheriso rb C18，5μm，流动相为甲醇-水（60：40），流速1ml/min，检测波长299nm.样品用乙醇超声处理。

　　其它指标，如：陈斌等采用超临界流体萃取技术和毛细管气相色谱的联用技术测定中成药六应丸中冰片和丁香酚的含量。气相色谱仪为HP-5890 SeriesⅡ，FID检测器，25m×0.32mm，0.52μm，HP-5色谱柱（crosslinked 5%Ph Me Silicone）。SFE的最佳萃取条件为：压力48.2Mpa，温度60℃，改性剂量0.2ml，静态萃取时间10min.色谱条件：气化温度250℃，检测器温度270℃，柱温160℃，载气N2，柱头压55kPa，分流比100：1，内标为麝香草酚。

　　倪坤仪等使用自制的1-溴乙酰基对硝基苯为衍生试剂，制成对硝基苯甲酰甲基酯，在254nm检测，分离测定了牛黄及其制剂（六应丸等）中胆酸、猪去氧胆酸等的含量。［医学 教育网 搜集 整理］

　　牛黄解毒片含量测定方法

　　牛黄解毒片处方为：人工牛黄5g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g.

　　2005《中国药典》牛黄解毒片含量测定项下：

　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为315nm.理论板数按黄芩苷峰计应不低于3000.

　　供试品溶液的制备：取本品20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，取0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加70%乙醇30ml，超声处理（功率 250w，频率33khz）20分钟，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻 度，摇匀；精密量取2ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

　　文献报道的以黄芩苷为指标的，如：吴丽群用hplc法 测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用agilent-1100高效液相色谱仪，色谱柱为diamonsic18，200×4.6mm id，5μm，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（55：45），检测波长274nm，柱温室温，流速1.0ml/min.样品用70%乙醇超声处理，结果 回收率为101.6%，rsd小于1.3%.

　　李静瑜用hplc法测定牛黄解毒片中黄芩苷的含量，采用惠普hp1100高效液相色谱仪，色谱柱为hp hypersil-ods（5μm，125×4mm），流动相为甲醇-水-磷酸（45：55：0.2），检测波长315nm，柱温室温。

　　陈胜璜用双波长法测定牛黄解毒片中黄芩甙的含量，采用日本岛津uv-265紫外分光光度计，双波长为240.2nm和278.0nm，样品用75%甲醇超声处理。

　　以蒽醌类为含量测定指标的文献报道较多，如：李太平等用hplc法测定了大黄素、大黄酸的含量，采用岛津lc-10avp液相色谱仪，色谱柱为 diamonsil （tm 钻石），c18柱（20cm×4.6，5μm），流动相为甲醇-水-磷酸（720：280：1），检测波长254nm，流速1.5ml/min，柱温 30℃。样品用甲醇超声处理后用盐酸水解、氯仿提取，结果大黄素进样量在0.469～1.407μg时呈良好的线性关系（r=0.9992），大黄酸在进 样量为0.3125～0.9375μg时呈良好的线性关系（r=0.9992），加样回收率分别为98.2 %（大黄素）， 98.4%（大黄酸），rsd分别为0.43%（大黄素），0.72%（大黄酸）。［医学教育 网 搜集整理］

　　杨冬梅等用薄层扫描法测定了大黄素的含量，采用岛津cs-930薄层扫描仪，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液，硅胶g板，λs=440nm，λr=560nm.样品用乙醚超声处理。

　　以胆酸为指标的，如：凌丽美用薄层扫描法测定了胆酸的含量，以异辛烷-正丁醚-冰醋酸（8：5：5）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，双波长反射 法锯齿扫描λs=390nm，λr=650nm.样品的处理方法：用甲醇超声提取，再用20%氢氧化钠回流提取，用稀盐酸调节ph值至2，用醋酸乙酯提取。

　　四物合剂处方为：当归250g，川芎250g，白芍250g，熟地黄250g.

　　2005《中国药典》四物合剂含量测定项下：

　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以异丙醇-甲醇-醋酸-水-（2：25：2：71）为流动相；检测波长为230nm.理论板数按芍药苷峰计应不低于2000.

　　供试品溶液的制备：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

　　文献报道的方法一般以藁本内酯为指标，如：苗爱东等用spe-hplc测定四物合剂中藁本内酯的含量，采用美国waters高效液相色谱系统，色谱柱为 phenomenex luna c18 （ 5μm，4.6mm×150mm），流动相为甲醇-水（ 65：35），流速1ml/min，温度35℃，检测波长325nm.样品用水超声处理后用已处理好的high capacity c18固相萃取柱（10ml甲醇活化， 5ml水平衡）处理，取甲醇洗脱液。藁本内酯在0.175～0.7μg范围内线性关系良好（r =0.9999），平均回收率100.2，rsd为1.6 （n =6）。