【摘要】  目的：探讨建立一种肝硬化基础上大鼠肝癌模型的方法。 方法：60只雄性SD大鼠随机分为两组，对照组和实验组，按60 mL/L CCl4和100 mL/L食用白酒的方法诱导肝癌模型。 观察两组大鼠不同时期质量变化，死亡率，肝假小叶形成率及肝癌结节发生率。 结果：诱导16 wk后， 对照组大鼠质量明显增加，无死亡，无肝硬化，无肝癌形成。 实验组大鼠在实验过程中质量增长缓慢，2 wk后假小叶形成率90%，继续诱导4 wk后癌结节形成率40%. 实验过程中大鼠的死亡率为10%. 结论：CCl4和食用白酒可成功诱导大鼠肝硬化模型，延长诱导时间可产生一定数量的肝癌模型。

　　【关键词】  肝硬化； 肝肿瘤； 动物模型； 四氯化碳

　　0引言

　　肝硬化基础上的肝癌在我国发病率比较高，也是一种常见及重要的死亡原因。建立一个类似于人类肝硬化基础上肝癌的动物模型是深入研究肝癌的不可缺少的环节。本实验我们通过腹部皮下注射CCl4并用100 mL/L食用白酒代替饮用水复制大鼠肝硬化模型，通过延长造模时间，来探讨建立一种理想的肝硬化基础上的肝癌动物模型的方法。

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　纯系SD雄性大鼠60只，体质量180～220 g，购自第四军医大学实验动物中心，按清洁级标准饲养，普通颗粒饲料喂养。 四氯化碳（分析纯）购自宁波市江东化学试剂厂（批号：9406661）。 橄榄油购自上海卫辉化学试剂厂（批号：930112）。 TD型电子天平（余姚市金诺天平有限公司）由第四军医大学动物实验中心提供。显微镜（Olympus）由西安市铁路中心医院病理科提供。

　　1.2方法

　　将实验动物随机分成2组，每组30只。对照组：按3 μL/g体质量给予橄榄油溶液腹壁皮下注射，2次/wk，普通饲料加清水喂养； 实验组大鼠按3 μL/g体质量给予600 mL/L CCl4橄榄油溶液腹壁皮下注射，100 mL/L食用白酒溶液作为饮用水，普通颗粒饲料喂养16 wk.监测实验期间大鼠体质量变化、活动及对外界的反应情况，同时记录大鼠死亡情况及死亡时间。 在造模的第4，8，12，和16 wk观察两组大鼠肝脏的大体及病理组织变化。

　　统计学处理： 采用t检验， P<0.05认为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1大体观察对照组大鼠毛发有光泽，精神状态好， 活动多，食欲佳，对外界刺激反应灵敏， 实验组大鼠毛发凌乱， 无光泽，食欲差，精神萎靡， 活动少，对外界刺激反应慢。 对照组大鼠体质量显著增加，实验组大鼠实验过程中体质量增加缓慢，尤以前期增长更为缓慢。 第12周时，实验组大鼠体重与对照组大鼠体质重相比差异有统计学意义［（286±12） g vs （398±16） g， P<0.01］。 实验过程中对照组大鼠无死亡，实验组大鼠的死亡率为10%.

　　2.2肝脏组织学改变对照组大鼠肝脏红润，镜下细胞大小一致，细胞排列呈条索状，以中央静脉为中心呈放射状，肝窦无狭窄，小叶及汇管区无炎细胞浸润，表面光滑无结节，实验组大鼠诱导4 wk可见肝细胞变性、坏死，8 wk可见部分肝细胞变性和坏死，坏死以小叶周围显著，汇管区少量炎症细胞浸润及纤维组织增生，12 wk可见肝内广泛假小叶形成，假小叶内可见纤维再分隔现象，现时伴有明显的肝细胞再生结节，16 wk癌变肝组织可见癌巢形成，癌细胞具有多形性和明显异型性呈多角型，核大，核仁明显，并可见多核巨细胞（图1）。

　　3讨论

　　CCl4是最为常用的肝脏毒素，最早、最广泛用于实验性肝纤维化研究［1-2］，其诱导慢性肝损伤的机理是：在肝细胞内质网中，CCl4通过肝微粒体细胞色素氧化酶激活后，产生自由基CCl3及Cl. 还可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原，肝细胞从合成分泌Ⅲ型胶原变为合成分泌I型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化。 乙醇法诱导慢性肝损伤的机制是：乙醇进入肝细胞线粒体三羧酸循环，脂肪酸氧化减少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝内蓄积导致肝细胞脂肪变。肝脏持续的炎症反应激活kupffer细胞，同时乙醇还可以直接损伤血管内皮，甚至发展为肝硬化。此外， 乙醇可增强CCl4对肝细胞的毒性作用，因此CCl4与乙醇联合应用可促进肝硬化的形成。金峰等［3］ 将SD大鼠分为两组，实验组给予浓度逐渐增加的CCl4，并用食用白酒代替医用乙醇溶液，对照组给予单纯CCl4，结果发现实验组9 wk内死亡率为7.5％，对照组为17.5％；镜下假小叶形成率实验组为90.0％，对照组为75.0％，并认为适度提高CCl4的浓度并采用食用白酒代替医用乙醇溶液诱导大鼠肝硬化模型的死亡率低，成模率高。 本实验在此研究基础上，我们采用600 mL/L CCl4联合100 mL/L乙醇方法诱导肝硬化， 结果发现实验组12 wk内大鼠死亡率为10%， 假小叶形成率为90%， 并在此基础上继续给予相同条件诱导4 wk， 结果发现部分大鼠癌结节形成，形成率为40%. 实验表明基于传统的肝硬化造模方法，通过延长造模时间可以对大鼠的肝脏持续产生损伤，这种损伤到一定程度可诱发癌变的发生，产生一定数量的肝癌模型。

　　综上所述，本实验成功地制备了大鼠肝硬化基础上的肝癌模型，并在显微镜下观察到了大鼠的肝硬化结节形成及镜下癌结节、癌细胞形成，为以后研究肝癌打下了基础。

　　【参考文献】［1］韩德五，马学慧，赵元昌。 肝硬化动物模型的研究［J］。 山西医药杂志，1979， 4（1）：1-6.

　　［2］Chae HB， Jang LC， Park SM， et al. An experimental model of hepatic fibrosis induced by alcohol and CC14： Can the lipopolysaccharide prevent liver injury induced by alcohol and CC14［J］？ Taehan Kan Hakhoe Chi， 2002， 8（2）：173-178.

　　［3］金峰，衰芳，薛建设，等。 四氯化碳综合法诱导大鼠肝硬化模型方法的探讨［J］。 福建医药杂志，2003，25（5）：127-128.