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1.分段沉淀法:利用皂苷难溶于乙醚、丙酮等溶剂的性质及相互间溶解性的差异,将粗皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中,然后逐滴加入乙醚、丙酮或乙醚-丙酮(1:1)的混合溶剂(加入的乙醚量以能使皂苷从醇溶液中析出为限),摇匀,皂苷即析出。
2.胆甾醇沉淀法:甾体皂苷与胆甾醇可生成难溶性分子复合物,利用这条性质可以与其他水溶性成分分离开来,达到精制的目的。具体步骤是先将粗皂苷溶于少量乙醇中,再加入胆固醇的饱和乙醇溶液,直至不再析出沉淀为止(混合后需稍加热),收集沉淀,用水、醇、乙醚顺次洗涤,以除去糖类、色素、油脂等杂质,然后干燥沉淀,放入连续提取器中,用乙醚提取,医学教|育网搜集整理此时复合物可被分解,分解出来的胆固醇被乙醚萃取,残留物即为较纯的皂苷。
3.铅盐沉淀法:可以分离酸性皂苷和中性皂苷,方法是将粗皂苷溶于少量乙醇中,加入过量饱和的中性醋酸铅溶液,搅拌,使得酸性皂苷完全沉淀,然后再向滤液中加入饱和碱性醋酸铅溶液,中性皂苷又能沉淀析出。最后进行脱铅处理,即可使酸性、中性皂苷得到分离。
4.色谱分离法(1)吸附色谱法:常用的吸附剂是硅胶、氧化铝和反相硅胶,洗脱剂一般采用混合溶剂。
(2)分配色谱法:由于皂苷极性较大,可采用分配色谱法进行分离。一般用低活性的氧化铝或硅胶作吸附剂,用不同比例的氯仿一甲醇一水或其他极性较大的有机溶剂进行梯度洗脱。
(3)高效液相色谱法:一般使用反相色谱法。
(4)液滴逆流色谱法:液滴逆流色谱法分离效能高,可以将结构极为相似的成分分开。