（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。

　　（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。

　　（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。

　　（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。

　　（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。

　　（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。

　　（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管医|学教育网搜集整理。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

　　（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。

　　（9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。