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一、基本原理
紫外--可见分光光度法:是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小,波长短(频率大)的光线能量大。 100nm、200nm、400nm、800nm、400um、1m通指X-射线、紫外区、可见区、红外区、微波区、无线电波区
Beer-lambert定律: A=Elc
A--吸收度
E-吸收系数
l ---液层厚度
c---溶液浓度吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律,重要前提是单色光。
摩尔吸收系数:指在一定波长下,溶液浓度为1mol/L , 厚度为1cm时的吸收度,用 表示。
百分吸收系数:指在一定波长下,溶液浓度为1%(W/V) , 厚度为1cm时的吸收度,用 表示。
影响Beer定律因素:化学因素,光学因素
二、紫外--可见分光光度计:
主要部件:
1、 光源:要求光谱的光源,
2、 氢灯和钨灯(350nm)
3、 单色器:进口狭缝、准直镜、色散元件(棱镜和光栅)、聚焦透镜和出口狭缝组成。
4、 吸收池:用光学玻璃制成的吸收池,
5、 只能用于可见光区。用熔融石英(氧化硅),
6、 可见紫外光区。
7、 检测器:光电池:(硒光电池:用于可见光;硅光电池:紫外可见光) 内阻小,光电管:内阻高,电流易放大 。
8、 易疲劳。
9、 讯号处理和显示器
三、定性与定量方法:
(一)、定性鉴别:是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。
1、对比吸收光谱特征数据
2、对比吸收度(或吸收系数)比值
3、对比吸收光谱的一致性
(二)、纯度检查:杂质检查与杂质限量检测
(三)、含量测定:
1、吸收系数法
2、标准曲线法
3、对照法