(1)外标法:若标准曲线过原点,测定组分含量变化不大,可使用外标一点法。由于中药制剂中测定组分含量波动范围较大,所以最好采用标准曲线定量。
(2)内标法:中药制剂组成复杂,若使用内标法,会增加分离的难度,其组分很容易干扰内标峰,所以中药制剂含量测定中,当组成相对简单,杂质不干扰内标峰时,才使用内标法。
(3)供试品溶液的制备 由于高效液相色谱法本身具有分离的功能,因此所用供试品一般经提取制得,不在需要纯化处理。但组成复杂的制剂,仍需采用萃取、柱色谱等预处理方法对供试品进行纯化处理。
中药制剂多含有糖,制备供试液时,宜使用高浓度的醇或其他有机溶剂提取测定组分,最好不使用水为溶剂,以免提出糖污染色谱柱,提取的方法视制剂的情况而定,可采用萃取(用于液体制剂)、回流或超声震荡提取(固体制剂)等。 医.学教育网搜集整理
由于中药制剂组成复杂,分析时应在分析柱前加预柱。分析完毕后一般用水或低浓度的醇水先洗去糖等水溶性杂质,再用甲醇等有机溶剂将色谱柱冲洗干净。
示例 桂枝茯苓丸中桂皮酸的含量测定。本品桂枝为君药,采用高效液相色谱法测定其中桂皮酸的含量。
供试品的制备 精密称取本品细粉约1g,置50ml量瓶中,加50%甲醇40ml,超声震荡提取30分钟,放冷,加50%至刻度,离心10分钟(1200r/min),取上清液用0.45μm的滤膜过滤,取续滤液备用。
对照品溶液的制备 精密称取桂皮酸对照品适量,加50%甲醇定量稀释成每ml中含0.01mg的溶液。
色谱条件 Inersil 5ODS-Ⅱ柱(25cm×4.6mm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(29:71);检测波长285nm;流速1.0ml/min。
用外标法测定其含量。