三、vWF 的生物合成

　　vWF 在内皮细胞和巨核细胞中合成，合成过程在2种细胞中相似。最早翻译产物为2813个氨基酸的前-原- vWF 单体，信号肽在粗内质网内裂解，形成原- vWF （pro-vWF）。N-糖苷键位点开始糖基化，在一些位点上连接高甘露糖链，这是原- vWF 单体二聚体化所必需的，原- vWF通过C-端半胱氨酸残基形成肽链间的二硫键产生二聚体的原- vWF .由于单体不能形成多聚体也不能分泌，故二聚体化极重要。原- vWF 二聚体为以后过程的基本单位。原- vWF 二聚体形成后转移至高尔基体。在高尔基体内，高甘露糖侧链继续修饰形成复杂的糖链，O-糖苷键位点连接糖侧链并硫化。糖链修饰的结果使原- vWF 亚单位分子量增加到近310KD，但这些复杂的糖侧链对以后多聚化和分泌过程并非必要。在高尔基体内原- vWF 二聚体通过N-端的半胱氨酸形成二硫键产生原- vWF 多聚体，贮存在分泌器和Weibl-Palade体内，在这里裂解vWF AgⅡ成为成熟vWF ，vWF AgⅡ裂解过程中有特异的枯草菌蛋白酶样的蛋白酶参与。在分泌器中部分原- vWF 多聚体的vWF AgⅡ裂解，聚合的多聚体较小。在Weibl-Palade器中，可能有一定量的原-VWF未被裂解，但通常分泌前裂解vWF AgⅡ聚合成大分子量多聚体。无论在成熟vWF 中存在与否，vWF AgⅡ在vWF 多聚化过程中起着重要的作用。在高尔基体内后期，二硫键异构酶通过形成链间二硫键对多聚体形成起着重要作用。医.学教育网搜集整理 

　　培养的人内皮细胞vWF 有两条分泌途径。一条为连续合成依赖的过程，称为体质性释放（constitutive release），另一条为刺激诱导的贮存部位Weibel-Palade体分泌以前合成的vWF 称为调节途径或刺激释放途径，体外内皮细胞新合成vWF 在连续不断地释放，体质性途径释放的为二聚体和小多聚体，含有vWF AgⅡ的原- vWF 亚单位或成熟亚单位。约5%新合成vWF 进入Weibel-Palade体，但贮存并通过刺激诱导途径释放的是由成熟亚单位构成的大多聚体，在vWF 功能中起更大的作用。凝血酶、组织胺、纤维蛋白、补体C5b-9氧基均可刺激诱导分泌vWF .血小板中vWF 由巨核细胞合成，合成过程与内皮细胞几乎相同，差别仅在巨核细胞内二聚体之间二硫键形成更广泛，形成比血浆vWF 更大的多聚体。血小板vWF 亚单位无蛋白水解作用，而每个血浆vWF亚单位可见到标志着蛋白水解作用的多条卫星带。血小板vWF 贮存在α-颗粒，两种途径在血小板表面表达：主要途径是诱导剂使α-颗粒释放vWF 并首先与GPⅡ/Ⅲ连接；另一途径是血小板形状改变导致血小板vWF 表面表达，与纤维蛋白连接。

　　四、vWF 的功能

　　vWF 在血小板粘附于内皮表面，血小板伸展和血小板之间的聚集过程中起着重要作用，vWF 和第Ⅷ因子连结可以稳定和保护第Ⅷ因子，并将第Ⅷ因子带至需要其参与促进凝血过程的部位。医.学教育网搜集整理

　　在中至高切变力下血小板粘附于内皮下层需要vWF 参与。血浆vWF 缺乏或质的异常使血小板很少能粘附于内皮下层。血小板伸展差，血小板聚集的数量和大小（血栓）均减少。vWF 与血小板受体GPIb 和GPⅡb/Ⅲa的结合起着重要的作用。vWF 与GPIb 连接使血小板粘附于内皮下层。vWF 与GPⅡb/Ⅲa的连接需要血小板激活，其它与GPⅡb/Ⅲa结合的粘蛋白如纤维蛋白原和纤维结合蛋白可竞争性抑制vWF和GPⅡb/Ⅲa的结合。尽管血浆vWF水平低于这些竞争性血浆蛋白质，但在局部表面vWF和GPⅡb/Ⅲa的连接仍具重要性。血小板vWF在凝血酶、ADP、胶原和其它诱导剂作用下释放并首先与GPⅡb/Ⅲa连结，与血浆vWF连接GPⅡb/Ⅲa不同，钙螯合剂和抗GPⅡb/Ⅲa的单抗不能完全抑制这种表达。阿斯匹林部分抑制ADP诱导的表达，但不能抑制凝血酶诱导的表达。持续的高切变力可以诱导血小板聚集，在小动脉或部分阻塞的动脉中可能会达到这种条件。高切变力下血小板粘附和血栓形成不依赖于纤维蛋白原，而主要与vWF连接GPIb 和GPⅡb/Ⅲa有关。这种聚集不需要诱导剂，但依赖于存在高分子量vWF并与GPIb 和GPⅡb/Ⅲa结合。内皮细胞和血小板来源的高分子量vWF多聚体比血浆中的作用更强，肾上腺素和肝素加强高切变力诱导的血小板聚集。因此vWF在血栓形成中可能起着重要的作用。

　　vWF的作用与其功能区的关系见表1.vWF与GPIb 的结合位点位于A1区509-695氨基酸残基。瑞斯托霉素诱导的vWF与GPIb 的连接，残基474-488和694-708起重要作用，可能为瑞斯托霉素的补充位点。Botrocetin（一种蝰蛇毒）也可调节vWF与 GPIb的连接。其与vWF的连接位点在539-643残基，而在514-542的氨基酸在Botrocetin-vWF-GPIb 间的反应中起重要作用。胶原与vWF的连接位点在542-622残基。肝素的连接位点在565-578.vWF与硫脂类的结合位点为569-584和628-645.这些作用位点均在A1区内。胶原的另一个结合位点在A3区内948-998，可能是vWF结合胶原的主要位点。与肝素结合的另一个位点在1-272残基 ，该位点亲和力低。vWF与GPⅡb/Ⅲa的结合位点在1744-1747残基，这是一个由精氨酸-甘氨酸-门冬氨酸组成的四肽序列（RGDS），在其他粘蛋白如纤维蛋白原和纤维结合蛋白存在同样的序列。具有四肽序列的多肽和纤维蛋白原γ-链十二肽段对vWF与GPⅡb/Ⅲa的连接有竞争性抑制作用。四肽序列在vWFAgⅡ中也存在，但作用不明。第Ⅷ因子与vWF的结合虽然是氢键，但很牢固。vWF的结合位点在1-272残基区段内，第Ⅷ因子的结合位点在轻链N端的酸性区，残基1669-1689内。游离第Ⅷ因子易被蛋白酶灭活，生存期很短。vWF与第Ⅷ因子结合可以防止第Ⅷ因子的快速灭活。他们结合的比例为1：1.vWF与内皮下层和血小板的结合以及损伤内皮细胞均释放vWF，使局部第Ⅷ因子浓度增加并接近其他凝血因子，从而加强了血栓形成。

　　vWF的糖链与vWF的功能有关。去掉vWF末端的唾液酸后，在无诱导剂的情况下，vWF可与GPIb和GPⅡb/Ⅲa结合使血小板聚集，表明唾液酸有防止vWF自发性地参与血小板聚集的作用。糖链在稳定蛋白质结构，保持可溶性，防止被纤溶酶，胰蛋白酶及糜蛋白酶等的蛋白水解作用降解中起重要作用。在瑞斯托霉素存在时，O-连接的糖链在vWF-GPIb之间的反应中可能起重要作用。