一、分光光度技术的定性方法

　　对待测物质进行定性分析的依据是最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε。

　　1.最大吸收波长λ_max方法

　　将不同波长的光透过待测物溶液测定其吸光度，用波长和吸光度作图可找出最大吸收峰，其相应的波长为最大吸收波长λ_max，和标准品的λ_max相比较，可对待测物质进行定性分析。

　　2.摩尔消光系数ε方法

　　准确配制待测物质的溶液，在最大吸收波长处测定其吸光度值，根据Lambert-Beer定律ε＝A／（L×C），可计算出待测物的ε，和已知ε的标准液相比较，可对待测物质进行定性分析。

　　二、分光光度技术的定量方法

　　1.标准曲线法

　　根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范围内与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准品溶液（浓度应包含高、中、低浓度范围），按标本处理方法作相同处理，在特定波长下测定吸光度，以标准液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，按最小二乘法的原理，将对应各点连成一条通过原点的直线，这条直线称为标准曲线。待测溶液测定吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。

　　制作和应用标准曲线时应注意下面几点：

　　（1）测定条件发生变化时（如更换标准品和试剂等），应重新绘制。

　　（2）标准品应有高的纯度，标准液的配制应准确。

　　（3）当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再测定。

　　（4）标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致医学教育`网搜集整理。

　　2.比较法

　　已知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计算出标本的浓度，计算公式为：

　　Cu＝（Au×Cs）／As

　　其中Cu和Au为标本管浓度和吸光度，Cs和As分别为标准管浓度和吸光度。用标准品法定量时，标准品的浓度应尽量和标本管浓度相近。

　　3.其它分析方法

　　包括差示法、多组分混合物分析和利用摩尔吸光系数分析等方法。