血糖测定是检查有无糖代谢紊乱的最基本和最重要的指标。
(一)样本:血浆或血清。
血糖测定一般可以测血浆、血清和全血葡萄糖。由于葡萄糖溶于自由水,而红细胞中所含的自由水较少,所以全血葡萄糖浓度比血浆或血清低10%~15%,且受红细胞比容影响。一般来说用血浆或血清测定结果更为可靠。除与标本的性质有关外,血糖测定还受饮食、取血部位和测定方法影响。餐后血糖升高,静脉血糖<毛细血管血糖<动脉血糖。所以如果不是特殊试验,血糖测定必须为清晨空腹静脉取血。
取血后如全血在室温下放置,血糖浓度每小时可下降5%~7%(约10mg/dl)左右;如立即分离血浆或血清,则可稳定24h.如不能立即检测而又不能立即分离血浆或血清,就必须将血液加入含氟化钠的抗凝瓶,以抑制糖酵解途经中的酶,保证测定准确。
(二)方法
1.氧化还原法:(Folin-Wu法)葡萄糖可使二价铜离子还原为一价铜离子,然后一价铜离子又可和某些化合物显色进行测定。葡萄糖与碱性铜试剂共热与磷钼酸成蓝色钼兰。
该法易受血中其他还原糖的干扰,现已淘汰。
2.缩合法:邻甲苯胺法(0-TB法)
利用邻甲苯胺类在酸性环境中可与葡萄糖醛基缩合成葡萄糖基胺,后者脱水生成Schiff氏碱,再经结构重排,生成有色物质。
该法操作简便,灵敏度高,主要缺点是试剂腐蚀性大,邻甲苯胺被怀疑有致癌性,既有碍于健康又易损坏仪器。
以上非酶法均为非特异性方法,由于非糖还原物质,如谷胱甘肽,维生素C、肌酸、肌酐、尿酸等也都能参与反应,可使结果比酶法偏高0.3~0.6mmol/L.
3.酶法:包括葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)偶联法、己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶-氧速率(GOD-OR)法。
酶法采用特定的酶促生化反应步骤,因此具有特异性高。
(1)葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法(GOD-POD法):目前应用最广泛的常规方法。医学教育网|搜索整理
505nm比色,其色泽深浅与葡萄糖浓度成正比。
评价:准确度、精密度、灵敏度和稳定性良好是目前血糖测定的首选方法。
GOD催化的反应特异,只有葡萄糖反应,POD不特异受干扰因素较多,如血中有还原性物质,如尿酸、维生素C、胆红素和谷胱甘肽等可使H202还原为H2O,可致结果偏低。
(2)葡萄糖氧化酶-氧速率法(GOD-OR法):葡萄糖氧化酶每氧化标本中的一分子葡萄糖便消耗一分子氧,用氧敏感电极测定氧消耗速率,便可知葡萄糖含量。此法准确性和精密度都很好,但只能用于特殊的分析仪。
(3)已糖激酶法(HK法):是目前公认的参考方法。
NADPH在340nm有吸收峰,其吸光度增加与葡萄糖浓度成正比。
该反应第一步不特异,任何己糖均可参与,第二步特异,只有G-6-P才能反应。
评价:本法准确度和精密度高,特异性高于葡萄糖氧化酶法。干扰因素少,轻度溶血、脂血、黄疸、肝素、EDTA等不干扰测定。
试剂较贵。
(三)参考值:3.61~6.11mmol/L(65~110mg/dl)。
(四)临床意义
1.诊断高血糖症和糖尿病:血糖浓度>7.0mmol/L(126mg/dl)称为高血糖症。引起高血糖症的原因很多,有生理性和病理性。
2.诊断低血糖症:血糖浓度<2.8mmol/L(50mg/dl),称为低血糖症。引起低血糖的原因很复杂,主要有:空腹低血糖、反应性低血糖、药物引起的低血糖等后述。