粪便隐血试验是检验技师需要了解的知识,医学教育网搜索整理如下:
当上消化道少量出血,红细胞被破坏,肉眼不见血色,镜检不能看到红细胞,称为隐血。检测隐血的试验方法称为隐血试验。
一、方法
(一)邻-甲苯胺法[原理]血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶活性,能催化过氧化氢放出新生态的氧,将邻-甲苯胺氧化为邻-甲偶氮苯,呈现蓝色。
【试剂】
1.邻-甲苯胺冰乙酸溶液:取AR级邻-甲苯腊150ml,加冰乙酸至lOOOml.可借用血糖邻-甲苯胺试剂。
2.1mol/L过氧化氢溶液。
[操作]用竹签挑取少许粪便于白瓷板、玻片或滤纸上,滴加邻-甲苯胺冰乙酸溶液2-3滴,再加过氧化氢溶液2-3滴,混匀后立即观察结果。也可用棉签涂取少许粪便,然后将邻-甲苯胺冰乙酸溶液和过氧化氢溶液直接滴加在棉签上,立即观察结果。
【结果判断】
++++:加入试剂后立即出现黑蓝色。
+++:加入试剂后立即出现蓝褐色。
++:加入试剂后初显浅蓝色,逐渐呈明显蓝褐色。
+:加入试剂lOs后,初显浅蓝色渐变为蓝色。
-:加入试剂2分钟后仍不变色。
【注意事项】
1.过氧化氢易分解失效,要经常检查。方法是将其滴加在血膜上,若逐渐产生较多小气泡表示有效,否则要重新配制。
2.试验前3天禁食动物血、肉、肝及铁剂、中药或生食富含叶绿素食物等,以免引起假阳性;粪便脓汁中的中性粒细胞内过氧化物酶也可引起假阳性,可将标本用生理盐水制成糊状煮沸2分钟,冷却后再进行试验。
3.维生素C等还原性物质可干扰过氧化氢对显色物的氧化,引起假阴性。
4.用正常粪便或在其中加入少量溶血液制备阴性或阳性质控标本,每天与待检标本平行测定进行质控。试验用具应加热去除污染的过氧化物酶,避免对试验的影响。
(二)免疫胶体金试纸法
【原理】
在特制的纤维试纸条上预包被金标记抗人血红蛋白抗体(Au-Ab1),在检测线和控制线上分别固定抗人血红蛋白抗体(Ab2)和针对金标记抗人血虹蛋白抗体的第二抗体(Ab3)。检测时,若存在人血红蛋白(Hb),由于渗透作用,将在检测线处形成“Ab2-Hb——Ab1-Au”夹心结构,同时在控制线处形成“Ai—Ab1-Au”,出现两条色带,呈阳性反应;若不存在Hb,则仅在控制线处出现一条色带。
【操作】 1.取一洁净干燥载玻片,滴加蒸馏水1-2滴。
2.用竹签挑取少许粪便,均匀涂抹于蒸馏水中,使成混合液,并让混合液集中。
3.将粪便隐血检测试带的反应端浸入混合液中,5分钟内观察结果。
【结果判断】
阳性:控制线和反应线均显示色带(即出现两条色带)。阴性:仅在控制线出现一条色带。
无效:不出现色带或控制线不出现色带为无效,应重做试验。
【注意事项】
1.试带应低温保存,不能冰冻,用前先复温。
2.粪便必须多部位多层面采集,尤其对硬质粪便。
3.用蒸馏水涂片。试带浸入时不要超过标记线。
4.若粪便外观呈柏油样而试验为阴性时,可能是由于血红蛋白过多,出现抗原过剩(前带现象),此时应将粪便混合液稀释后再进行检测。
(三)方法学评价
1.化学法是粪便隐血试验的传统方法,按其试剂的组成成分及操作方法分为普通化学法和化学试带法(将化学试剂组成成分置于试纸条上)。其原理基本相同,都是血红蛋白中的亚铁血红素具有类似过氧化物酶的作用,催化过氧化物产生新生态的氧,氧化色原显色,如邻。甲苯胶法、邻联甲苯胶法、匹拉米洞法、无色孔雀绿法等。这些方法简单易行,灵敏度也能满足临床要求,但缺乏特异性和准确性,此外化学试剂不稳定,久置后可使反应减弱。外源性血红蛋白、肌红蛋白、植物性过氧化物酶等均可引起假阳性,食入维生素C或其他具有还原作用的药物可引起假阴性,因此,要求素食3天后,再收集标本进行试验。
2.免疫学方法是粪便隐血试验发展普及最快的方法。通常采用单克隆或多克隆抗体,针对粪便中的人血红蛋白或人红细胞基质,用免疫学方法检测粪便中的隐血,如免疫单扩法、酶联免疫吸附法、免疫斑点法、免疫肢体金夹心法等。免疫学方法操作简便、快速,特异性好,灵敏度高,因而不需选择饮食。免疫学粪便隐血试验方法被认为是目前对大肠癌普查最适用的方法。该类方法主要检测下消化道出血,上消化道出血有近50%不能检出,原因是血红蛋白被消化酶降解变性或消化而失去抗原性、患者的血红蛋白抗原与抗体不匹配或者过量出血而使抗原过剩等。因灵敏度很高,某些正常人尤其是服用胃肠剌激药物时也可出现阳性反应。
3.粪便隐血试验无论用什么方法,均要求多部位多层面采集粪便标本,多次试验,以保证检出率,并区分出血是间断性还是持续性。
二、临床意义
1.粪便隐血试验对慢性消化道出血的诊断有重要价值,该试验阳性说明消化道有出血,如消化道溃疡、消化道肿瘤、结肠息肉、钩虫病或药物性胃粘膜损伤等都可出现阳性。
2.粪便隐血试验可鉴别消化道出血病变的性质,如消化道肿瘤时呈持续阳性,而消化道溃疡出血多为间断阳性。
3.粪便隐血试验常作为消化道恶性肿瘤诊断的一个筛选指标,尤其对中老年人早期发现消化道恶性肿瘤有重要价值。