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循环免疫复合物补体相关测定法

2013-01-08 19:06 来源:
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IgG和IgM类抗体与抗原结合后,重链CH2区的补体结合点暴露,可以固定C1q并激活补体的系列反应,这是利用补体有关技术检测免疫复合物的基础。

1.C1q结合试验:将待检血清先行加热56℃30min,以灭活其中的补体和破坏已与CIC结合的C1q,空出补体结合点。CIC与C1q的结合可用多种方法进行检测,常用的有以下3种医`学教育网搜集整理。

(1)液相法:先将同位素标记的C1q与灭活过的血清标本混合作用,再加入0.5%(终浓度)的PEG将结合了C1q的CIC沉淀下来,通过检测沉淀物中的放射活性来计算CIC的含量。

(2)固相法:先将C1q吸附于固相载体表面,加入待检血清使CIC与C1q结合,再加入同位标记的或酶标记的抗人IgG或SPA,最后检测其放射活性或酶活性。

(3)C1q偏离试验:先将同位素标记的C1q与灭活的血清标本混合,再加抗体致敏的绵羊红细胞,温育后离心,检测红细胞上的放射活性。红细胞的放射活性与免疫复合物的量呈负相关。

2.补体试验本法的原理类似补体结合试验。将一定量的补体(多为混合豚鼠血清)与灭活的待检血清混合温育,反应后加入致敏绵羊红细胞。如出现溶血表示血清中没有CIC存在;不溶血说明标本中有CIC存在医`学教育网搜集整理。将血清标本做不同稀释,并与已知的热聚合IgG作对照,可以计算出CIC的含量。本方法的灵敏度较高,且易于在一般实验室开展,不足之处是特异性较差。

3.胶固素结合试验胶固素(conglutinin)是牛血清中的一种正常蛋白,能与C3d特异性结合;体内与补体结合的CIC都带有C3d,因此胶固素可与CIC结合。用一定量的胶固素包被塑料管,往管中加入稀释的血清标本,温育后再加入同位素标记或酶标记的抗人IgG抗体,最后检测各管的放射活性或酶活性,计算CIC的含量。

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