核酸检测方法研究进展

随着分子生物学技术的发展，核酸检测越来越受到人们的重视并将其与抗原抗体反应的高特异性结合起来形成了免疫PCR技术。这一技术具有特异性强和灵敏度高的特点，可用于单个抗原的检测。这促进了应用PCR技术进行HIV核酸检测的快速发展。自2001年起[25]，COBAS Ampliscreen HIV? 1 Test等4种HIV核酸检测技术通过了FDA的批准，作为进筛选分析技术来进行HIV?1的检测。最近，实时荧光PCR检测技术的应用使HIV核酸检测技术又进入到一个新境界[26]。通过这种技术，不但可以进行定性检测，更重要的是可以进行定量检测。Barletta等将这一技术应用到HIV的检测中，大大降低了病毒载量的检测限(0.66个拷贝相当于0.33个病毒粒子)。2002年4月国家药品监督管理局(SDA)批准了第一个HIV荧光PCR检测试剂盒。

p24抗原检测方法研究进展

随着检测灵敏度不断提高， p24抗原的检测逐渐从主要用于在窗口期辅助早期诊断和进一步缩短窗口期，发展到用于病毒载量测定。目前，p24抗原在以下几方面都有重要应用：HIV?1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV?1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第4代HIV?1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV?1抗体确认阴性者的辅助诊断；监测病程进展和抗病毒治疗效果。但现有监测病程进展和抗病毒治疗效果均采用昂贵、操作复杂的病毒RNA测定方法。我国HIV/AIDS患者绝大部分是在基层，检测1次病毒载量需要上千元(约1 500元)，很难在基层普及，对疾病的治疗和控制很不利。高灵敏度p24 抗原检测方法的建立成为在发展中国家使用的病毒载量测定方法的一种选择。

近几年，国外对建立高灵敏度检测p24抗原的研究一直没有停止，如为了提高检测血清中p24抗原的敏感性，将血清中免疫复合物解离后再进行测定，发展了ICD p24抗原测定法。2003年Sutthent[27]等将免疫复合物热解离后通过TSA信号放大系统使用ELISA进行检测，使p24抗原检测的最小检出值由原来的10 pg/mL降低到0.5 pg/mL，在HIV?1抗体阳性母亲所生婴儿早期的诊断中与RNA检测相当，与HIV核酸检测具有可比性，具有重要的实用价值。2004年，来自HIV病毒的发现者之一美国马里兰大学Dr.Robert C.Gallo所领导的实验室的一篇高灵敏度检测p24抗原的研究论文引起了广泛的关注，p24抗原的检测成为比病毒核酸检测更灵敏的方法。2005年来自美国马里兰大学的一篇长篇综述也开始关注p24抗原的检测，认为这可以作为低成本、适合在发展中国家使用的替代现有昂贵的RNA测定方法的一种选择。

目前，商品化的p24 抗原的标准检测方法主要是依据夹心ELISA原理。该方法是用抗p24抗原的抗体包被固相的双抗体夹心法，是检测抗原最为常用的方法，国内尚未见商品化的HIV p24抗原检测试剂的生产。综上所述，用高灵敏的分析方法诊断艾滋病将有助于实现早期诊断，避免漏检，有助于对治疗艾滋病药物的疗效评价、预测和监测疾病进程，提高检测的灵敏性、缩短窗口期，是HIV诊断方法和诊断试剂持续发展的主要方向。

以上简述了HIV的流行概况和实验室的检测技术，相信随着HIV实验室检测技术的不断的改进，尤其是核酸检测技术的不断应用，HIV检测的窗口期将会逐步缩短，经输血传播HIV可能性也将会大大减小。