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为方便广大考生复习,医学教育网整理了临床医学检验技士考试关于T细胞功能测定的相关内容,以供参考。
1.淋巴细胞转化试验
T细胞在体外受特异性抗原(旧结核菌素等)或有丝分裂原(pHA、ConA等)刺激后,能转化为淋巴母细胞。试验时取外周血或分离的淋巴细胞,加入有丝分裂原或特异性抗原,在培养液中培养72小时,经涂片染色后镜检计算转化百分率。正常人为70%左右,转化率低表明细胞免疫功能下降。若在培养终止前6小时加入3H-TdR,经β液体闪烁仪检测淋巴细胞内3H-TdR的掺入量,亦可算出转化率。医学教|育网搜集整理由于活的增殖细胞具有吸收四甲基偶氮唑盐(MTT)的能力,活化的线粒体能裂解四氮唑环而产生颜色反应,并借助酶标仪于波长570nm下测吸光值作为判断指标。MTT法简单易行,常被一般实验室采用。该试验可检测细胞的增殖和细胞毒活性。
2.淋巴细胞参与的细胞毒性试验(LMC-T)
系检测CTL的方法。当CTL再次接触靶抗原时,即表现出破坏、溶解靶细胞的特性。这种特性称为LMC,检测时将受试者外周血单个核细胞(效应细胞)与传代的51Cr标记的肿瘤细胞(靶细胞)按一定的效靶比例混合,于37℃孵育一定时间,离心后用γ计数器测定上清同位素强度,其强度与效应细胞的细胞毒性成正比。按下式计算溶解百分率作为判断指标。可通过测定肿瘤患者CTL对肿瘤细胞的杀伤力,判断患者的预后和观察其疗效。
溶解百分率=(实验组cpm-自发释放组cpm)×100%/(最大释放组cpm-自发释放组cpm)
3.T细胞功能的体内测定法
在临床上常用的方法是体内皮试法,细胞免疫功能正常者可出现硬结、红斑等阳性反应,细胞免疫功能低下者常呈弱阳性或阴性反应。临床上常作为某些病原微生物感染的诊断和观察肿瘤患者的细胞免疫状态、疗效、及其预后的指标。①生物性抗原皮肤试验:分为特异性与非特异性两类,前者包括以结核菌素(OT)、纯蛋白衍生物(PPD)及链激酶-链道酶(SK-SD)等为抗原的皮肤试验,其中以旧结核菌素皮肤试验应用最为普遍。定量注射上述抗原于前臂屈侧皮内,24~48小时观察结果,局部出现红肿,硬结者(>0.5cm)为阳性。后者多用有丝分裂原如植物血凝素(PHA)作皮肤试验,一般在注射后6~12小时局部出现红斑、硬结,24~48小时可达高峰,硬结大于1.5cm为阳性。在特异性抗原皮试中,医学教|育网搜集整理若受试者从未接触过所试抗原,则多不出现阳性反应,因而往往作两种以上抗原皮试,以对受试者的细胞免疫功能作出综合评价。②化学性半抗原皮试:此类半抗原常用二硝基氯苯(DNCB)和二硝基氟苯(DNFB),皆系小分子物质,进入皮肤后即与组织蛋白结合,构成完全抗原并引起迟发型超敏反应。试验时先将受试者致敏,即将1%DNCB或DNFB丙酮溶液涂于前臂皮肤,24小时后洗去并于2~3周后再以小剂量DNCB或DNFB涂于同侧或对侧皮肤,以24~48小时后发生红肿、硬结、水泡或溃疡为阳性。细胞免疫功能低下或缺陷者,常呈弱阳性或阴性反应。但由于局部反应较大,病人难以接受。