1.抗体琼脂板的制备同单向扩散法，但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05M的巴比妥缓冲液。

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3.将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原（人血清）分别加入各孔中，每孔10或20微升，要求加量准确而不外溢。

4.把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳，电压4～6伏/厘米，电泳时间1～5小时，直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线，关闭电源。

5.取下琼脂板，以抗原孔中心为起点，量出各火箭状沉淀线的高。