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蛋白酶活力测定

2012-04-05 17:42 来源:
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照品溶液的制备 精密称取经 105℃干燥至恒重的酪氨酸 适量,加盐酸溶液〔取1mol/L盐酸溶液65ml,加水至1,000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。

供试品溶液的制备 取本品适量,精密称定,用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含 0.2 ~0.4 的溶液。

测定法 取试管6 支,其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ,另3 支各精密加入供 试品溶液1ml ,置37±0.5 ℃水浴中,保温5 分钟,精密加入预热至37±0.5 ℃的血红 蛋白试液5ml ,摇匀,并准确计时,在37±0.5 ℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液备用。另取试管2 支,各精密 加入血红蛋白试液5ml ,置37±0.5 ℃水浴中保湿10分钟,再精密加入 5%三氯醋酸溶 液5ml ,其中1 支加供试品溶液1ml ,另1 支加上述盐酸溶液1ml ,摇匀,滤过,弃去 初滤液,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法(附录Ⅳ A) 在275nm 的波长处测定吸收度,算出平均值AS 和A,按下式计算。

每g含蛋白酶活力单位数=(A×Ws×n)/(As×W×10×181.19)

式中

AS 为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws =1ml 对照品溶液中含酪氨酸的量,μg ;W=供试品取样量,g ;n=供试品的稀释倍数。

在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1 μmol 酪氨酸的酶量,为一个蛋 白酶活力单位。

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