1.在离心管中加入适量淋巴细胞分离液。

2.无菌采集静脉血若干毫升,注入盛有肝素的无菌小瓶中，（每1ml全血加0.1ml125-250U/ml肝素溶液）,加盖后立即轻轻摇匀,使血液抗凝。

3.稀释（外周血：稀释液=1：2取肝素抗凝血与等量生理盐水充分混匀）。

4.用刻度吸管沿倾斜的管壁，把稀释血缓慢叠加于分层液面上，医学/教育网注意保持清楚的界面（Ficoll：稀释血=1：2）。

5.放入离心机1500r/min离心20min（注：缓慢加速1-4档个3分钟）。

6.用吸管插到云雾层，吸取单个核细胞。置入另一离心管中，加入5倍以上体积的稀释液（生理盐水），1500rpm×10分钟离心，洗涤细胞。

7.重复洗涤一次，1500rpm×10分钟离心。

8.末次离心后，弃上清，加入含有10%小牛血清的RPMI1640，重悬细胞。

9.计数细胞后再调整细胞置所需浓度。

10.取一滴细胞悬液与一滴0.2%台盼兰染液混合，于血球计数板上，计数四个大方格内的细胞总数。

11.分离出的淋巴细胞置于培养瓶中二氧化碳培养箱培养。

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