生物素-亲和素系统的应用是什么呢?快来跟着小编了解一下吧!
一、生物素-亲和素系统基本类型及原理
(一)BAB法:也称为桥联亲和素-标记生物素法(BRAB),是以游离的亲和素(或链霉亲和素)作为桥联剂,将检测反应体系中抗原-生物素化抗体复合物与标记生物素(如酶标生物素)连接起来。
(二)ABC法:预先将亲和素(或链霉亲和素)与酶标生物素结合,形成可溶性的亲和素(或链霉亲和素)-生物素-过氧化物酶复合物(ABC或SABC)。当其与检测反应体系中的生物素化抗体(直接法)或生物素化第二抗体(间接法)相遇时,ABC(或SABC)中未饱和的亲和素(或链霉亲和素)结合部位即可与抗体上的生物素结合,使抗原-抗体反应体系与ABC(或SABC)标记体系连成一体进行检测。
(三)BA法:BA(或LAB)法是以标记亲和素(或链霉亲和素)直接与免疫复合物中的生物素化抗体连接进行检测。
二、生物素-亲和素系统在酶免疫测定中的应用
(一)将BAS与ELISA偶联可提高ELISA的灵敏度:每个亲和素可结合4个生物素,可使反应明显放大;亲和素与生物素间极高的亲和力,使反应结合更牢固稳定,而且特异性高;用小分子生物素代替酶标记抗体,可减少反应中的空间位阻。
(二)生物素-亲和素系统可作为均相酶免疫测定中高效的酶活性调变系统。
三、生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用
通常采用BA法,即用荧光素直接标记亲和素(或链霉亲和素);也可采用游离亲和素(或链霉亲和素)搭桥,两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素(BAB法)或荧光标记的抗亲和素(或链霉亲和素)抗体的夹心法。
四、生物素-亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶联,用于对终反应的放大(BA法)。
此外,BAS也可用于IRMA反应后B,F成分的分离。该法的优点是克服了其他IRMA法需多次离心的麻烦,待测复合物与固相结合更牢固,操作更简便。
五、生物素-亲和素系统在分子生物学中的应用
BAS在分子生物学领域中的应用主要集中在:
1.以生物素标记核酸探针进行的定位检测
2.用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化
3.将免疫测定技术与PCR结合建立免疫-PCR用于抗原的检测
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