发光剂的标记技术总结,跟着小编来学习一下吧!
(一)常用标记方法 小分子物质(如药物、激素等)的标记主要是通过偶联反应制备(直接偶联);生物大分子的标记是利用交联剂使标记物与被标记物分子结构中游离的氨基、硫氢基、羟基等基团形成不可逆的连接(间接偶联)。
常见有:碳二亚胺缩合法;过碘酸钠氧化法;重氮盐偶联法;N-羟基琥珀酰亚胺活化法。
(二)影响标记的因素
1.发光剂的选择。
2.被标记蛋白质的性质:选用较高的纯度和免疫学稳定性的抗原进行标记;抗体作为被标记物时,则要求具有较高的效价,应用提纯的IgG来代替全血清。
3.选择正确的标记方法。
4.原料比:IgG:发光剂:交联剂的克分子比(mol: 第十一章 生物素-亲和素放大技术mol:mol)会影响结合物的发光效率。
5.标记率:结合物中IgG与发光剂之间的克分子比。
6.温度:尽量选择较低的温度,以避免蛋白质在标记过程中活性的丧失。
7.纯化与保存:通过透析法、凝胶过滤法和盐析沉淀法等进行纯化。结合物一般可分装保存在-70℃条件下,最好冷冻干燥保存。
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