什么是荧光酶免疫测定,跟着小编来学习一下吧!
利用酶标抗体(抗原)与待检抗原(抗体)反应,借助酶反应荧光底物,经酶促反应生成稳定且高效的荧光物质,通过测定荧光强度确定待检抗原或抗体的含量。
(一)基本原理:以碱性磷酸酶(ALP)标记抗体(或抗原),以固相载体包被抗原(或抗体),碱性磷酸酶分解荧光底物4-甲基伞酮磷酸盐(4-MUP)形成4-MU,经360nm激发光的照射,发出450nm的荧光。
(二)方法类型
1.双抗体夹心法:固相抗体和碱性磷酸酶标记抗体与待检抗原反应,加入底物4-MUP,荧光强度与待检抗原含量成正比。
2.双抗原夹心法:用固相抗原和酶标记抗原与待检抗体反应,加入底物进行酶促发光,荧光强度与待检抗体含量成正比。
3.固相抗原竞争法:待检抗原和固相抗原竞争结合定量的酶标抗体,加入底物进行酶促发光反应,荧光强度与待检抗原含量成反比。
(三)方法评价
固相荧光酶免疫测定法,避免了血清和其他生物样品的背景荧光会干扰。
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